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Research Article
Maciej Kmieciak1, Amir Toor2, Laura Graham3, Harry D. Bear3, Masoud H. Manjili1
1Department of Microbiology & Immunology,Virginia Commonwealth University- Massey Cancer Center, 2Department of Internal Medicine,Virginia Commonwealth University- Massey Cancer Center, 3Department of Surgery,Virginia Commonwealth University- Massey Cancer Center
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Erratum Notice
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Retraction Notice
The article Assisted Selection of Biomarkers by Linear Discriminant Analysis Effect Size (LEfSe) in Microbiome Data (10.3791/61715) has been retracted by the journal upon the authors' request due to a conflict regarding the data and methodology. View Retraction Notice
为有效的协议
据报道,乳腺癌患者既存的免疫反应,对他们的肿瘤1,2。然而,这种免疫反应,未能提供完整的保护,对发展或复发的乳腺癌。为了克服这个问题,通过增加肿瘤反应性T细胞的频率,过继免疫治疗已聘用。扩大肿瘤特异性T细胞已被用于多种协议。然而,这些协议限制的肿瘤抗原体外抗原特异性T细胞的活化使用。最近,常见的伽玛链细胞因子如IL - 2,IL - 7,IL - 15和IL - 21已单独或联合使用的抗肿瘤免疫反应的3的增强。不过,目前尚不清楚制定工作,为扩大肿瘤反应性T细胞的最佳。在这里,我们提出了一个从FVBN202在收养的T细胞治疗乳腺癌HER-2/neu的阳性乳腺癌的转基因小鼠模型的肿瘤反应性T细胞的选择性激活和扩张的协议。该协议包括bryostatin-1/ionomycin(B / I)和IL - 2激活T细胞,在16个小时的肿瘤抗原的情况下。 /我的激活模仿细胞内的信号,导致T细胞的活化蛋白激酶C活性和细胞内钙离子增加, 分别为4。该协议具体激活肿瘤特异性T细胞,而造成不相关的T细胞。与IL - 7和IL - 15的B /我激活T细胞培养24小时,然后用IL - 2脉冲。 24小时后,T细胞被洗净,分割,并培养与IL - 7 + IL - 15增加4天。 前体外扩增的T细胞特异性肿瘤和抗肿瘤疗效是确定的。
1。分离淋巴细胞5
2。确定T细胞的细胞计数和流式细胞仪分析5折的扩展
3。确定体内的肿瘤特异性T细胞膨胀
4。确定抗肿瘤功能的前体外扩增的T 细胞 5,6
5。乳腺癌的小鼠模型
FVBN202转基因雌性小鼠(Charles River实验室),可用于肿瘤反应性T细胞的来源。这些小鼠MMTV启动子调控下的一个激活的大鼠神经转基因过度表达,因此开发4-10岁7个月之间的自发乳腺癌。这些小鼠癌前病变的乳腺增生,导管原位癌(DCIS)前自发carcinoma8发展。自发荷瘤小鼠的T细胞的捐助者。
6。代表性的成果:
激活T细胞与B /第一天真不与体内肿瘤致敏的T细胞杀死了16个小时。之后的B /我的选择性的肿瘤反应性T细胞,他们扩大了在为期6天的的文化与γ链细胞因子(图1)的2.8倍。 CD8 +和CD4 + T细胞也同样扩大与γ链细胞因子(图2)。 体外扩大T细胞对肿瘤的高响应,供体鼠敏感地认识到,作为评估所生产的干扰素γ神经积极小鼠乳腺癌(MMC)(图3)肿瘤细胞的存在。扩大体内的T细胞可以诱导细胞凋亡在神经积极MMC肿瘤CELLS这样的肿瘤细胞的可行性,从92%下降到61%在48小时内(图4)。

图1。折扩张在不同时间点淋巴细胞,激活B / I(1天)和γ链细胞因子体外扩增(3,5,7天)

图2,前后7天的扩张与γ链细胞因子的CD4 +和CD8 + T细胞的总百分比。

肿瘤刺激IFN -γ的生产从荷瘤小鼠与γ链细胞因子的扩大7天之前和之后中分离出的T细胞,用IFN -γELISA法图3。

图4扩大与γ链细胞因子对神经积极的小鼠乳腺癌(MMC)肿瘤细胞的T 细胞的体外细胞毒性作用。
为有效的协议
这项工作是由美国国立卫生研究院R01 CA104757格兰特(MH Manjili)的支持。我们非常感谢VCU梅西癌症中心的支持和英联邦基金会为癌症研究。
| 苔藓抑素 1 | Sigma-Aldrich | B7431-10ug | |
| 离子霉素 | 钙生化学 | 407950 | |
| 小鼠 IL-7 | PeproTech Inc | 217-17 | |
| 小鼠 IL-15 | PeproTech Inc | 210-15 | |
| 人 IL-2 | PeproTech Inc | 200-02 | |
| RPMI1640 | Invitrogen | 11875 | |
| FBS | Gemini 生物产品 | 100-106 | |
| 青霉素/链霉素 | Cellgro | 30-002-CI | |
| L- 谷氨酰胺 | Invitrogen | 25030081 | |
| β- 巯卡特–thanol | Sigma-Aldrich | M7522 | |
| 抗 CD16/32 抗体 | Biolegend | 101302 | |
| 膜联蛋白 V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒 | BD Biosciences 556547 | ||
| FITC-CD4 | Biolegend | 100406 | |
| PE-CD8 | Biolegend | 100708 | |
| 抗 c-Erb2/c–Neu | Calbiochem | OP16 | |
| PE-抗小鼠 IgG | Biolegend | 405307 | |
| 甲醛 | Polysciences, Inc. | 04018 | |
| 血球计数器 | Hycor | 87144 | |
| 光学显微镜 | VWR 国际 | V200073 | |
| 小鼠 IFN-γELISA 套装 | BD Biosciences 555138 | ||
| 细胞培养瓶 | Greiner Bio-One | 658175 |