糖原支化测定法，用于测量糖原支化的程度

1. 糖原支链的定性评估

将
1. 74.5 g 无水氯化钙加入 ~40 mL 水中并搅拌，制备饱和氯化钙溶液。再加一点水，继续搅拌。用水使体积达到 100 mL，并继续搅拌，直到 CaCl₂ 完全溶解。
2. 在 15 mL 试管中混合 50 μL KI/碘储备液与 13 mL 饱和 CaCl₂ 溶液，制备碘/CaCl₂ 彩色试剂的工作储备液。充分混合并储存在 4 °C 下，避光。在这些条件下，溶液可稳定至少 1 周。
3. 确定分支
   1. 在 1.5 mL 试管中，将 650 μL 碘/CaCl₂ 色试剂原液与 100 μL 水混合并充分混合。将溶液转移到一次性甲基丙烯酸酯比色皿中。
      注意: 比色皿中的溶液应为透明和淡黄色。
   2. 放入分光光度计中，以波长扫描模式运行，收集 330 nm 至 800 nm 的背景光谱。
   3. 在 1.5 mL 试管中，将 650 μL 工作碘/CaCl₂ 色试剂与 50 μg 牡蛎糖原混合。用水使最终体积达到 750 μL 并充分混合。将溶液转移到一次性甲基丙烯酸酯比色皿中。
      注意: 比色皿中的溶液应该是透明的，呈深橙色/棕色。
4. 放入分光光度计中，收集 330 nm 至 800 nm 的吸收光谱。
5. 用 50 μg 支链淀粉和 30 μg 直链淀粉重复步骤 1.3.3 至 1.4><。 注意:支链淀粉样品应为黄色/绿色，直链淀粉样品应为绿色/蓝色。两个样本都应该是清晰的。形成的有色复合物在室温下稳定，吸收光谱没有变化，至少 1 小时。
6. 为了获得未表征糖原样品的支链结构的指示，将 25 μg 至 50 μg 糖原与 650 μL 工作碘/CaCl₂ 颜色试剂混合。按上述方法作，用水将体积定至 750 μL，充分混合，然后转移至甲基丙烯酸酯比色皿中。
   注意:糖原样品应产生黄色/橙色到橙色/棕色，具体取决于存在的糖原的分支程度（外链的长度）。同样，样品应该是透明的。
7. 收集吸收光谱。