紫外-可见（UV-Vis）光谱法

1. 校准光谱仪

1. 打开紫外-可见分光光度计，并让光源预热适当时间（约 20 分钟），以使其稳定。
2. 用样品的溶剂填充比色皿，并确保其外表面清洁。该溶液将作为空白样，用于校正因溶剂散射或吸收引起的光损失。
3. 将比色皿放入分光光度计中。务必正确对齐比色皿，因为比色皿通常有两个面是用于手握的（可能带有凹槽），不应让光束穿过这些面。
4. 测量空白样的读数。其吸光度应尽可能低，但若有任何吸光度，应在后续样品的测量结果中予以扣除。某些仪器可能会自动存储空白数据并完成扣除。

2. 进行吸收光谱测定

1. 用样品填充比色皿。为确保转移完全，先用样品润洗比色皿两次，然后将其填充至约 ¾ 装满后，确保外部清洁，无指纹等残留物。
2. 将比色皿按正确方向放入分光光度计中。
3. 用盖子盖住比色皿，以防止环境光干扰。
4. 通过让仪器扫描不同波长并收集吸光度，来获取吸收光谱。波长范围可根据具体样品的信息进行设置，但通常采用200–800 nm的范围。二极管阵列仪器能够在一次运行中采集完整的吸收光谱。
5. 从收集的吸收光谱中，确定最大吸收值（λ_最大）。重复采集光谱以获得误差估计值 λ_最大值.
6. 为制作标准曲线，需采集一系列不同浓度样品的紫外-可见吸收光谱。分光光度计的线性检测范围通常有限，无法准确测量吸光度值大于1.5的样品。若样品的吸光度值超出仪器的线性范围，应将样品稀释，使吸光度值落在仪器的线性范围内。

3. 使用紫外-可见光谱法进行动力学实验

1. 紫外-可见光谱法可通过检测吸光度随时间的变化来用于动力学实验。进行动力学实验时，首先对样品进行初始读数。
2. 迅速加入试剂以启动化学反应。
3. 充分搅拌 加入样品中进行混匀。若添加量较少，可在比色皿中直接混匀；或者，先将试剂与样品混合后，迅速倒入部分混合液至比色皿中进行测定。
4. 在指定波长处测定吸光度 λ_最大 随时间推移对目标分析物进行测定。如果消耗了被测试剂（即 吸光度上升（因为吸收光的试剂减少），则该衰减速率可指示反应级数。
5. 使用标准曲线，绘制分析物浓度随时间变化的曲线图，将吸光度值转换为浓度。随后，可通过适当的方程对所得曲线进行拟合，以确定反应速率常数。