血液采集 II

从小鼠和大鼠身上采集血液对于各种科学研究都是必要的，研究人员已经开发了不同的方法来实现特定的实验目标。

在第一部分中，我们讨论了一般的抽血注意事项，并回顾了眼眶后出血、剪尾和划痕，以及心内采血方法。在这里，我们将概述从面静脉、下颌下静脉、大隐静脉和股静脉采血的程序。这些方法侵入性较小且不需要麻醉，这使得它们成为使用麻醉剂可能会混淆血液结果或其他数据的首选方法。

让我们从从小鼠面部静脉获取血液样本的程序开始。在鼠标上，有一条易于接近的面部静脉穿过脸颊。首先为该程序选择合适的设备。基本上，您需要一个用于采血的小离心管和一个不同尺寸的采血针。选择正确的柳叶刀取决于动物的年龄、性别和体重以及要收集的样本大小。有关柳叶刀选择的详细信息，请参阅文本协议。

通过使用 scruffing 技术约束动物来开始该程序。适当的约束可以最大限度地减少头部的左右移动，并有助于确保使用柳叶刀进行准确和安全的静脉穿刺。如果握把太紧，血流可能会受到限制，从而导致收集的体积减少。一旦动物被束缚，通过测量外眦下方的眼睛长度和尾部眼睛的宽度来定位面部静脉的大致区域。用柳叶刀的尖端轻轻感受颌骨末端的点。为了更准确地穿刺血管，您可能需要将鼠标放在一侧。

现在，在插入部位，将柳叶刀垂直于皮肤表面，尖端略微朝向鼻子。这很关键，因为如果柳叶刀尖端指向尾部，耳道将被刺穿，导致耳朵出血。要刺穿静脉，请用力推力并刺穿皮肤直至柳叶刀肩部。取出后，血液会开始流动。为了帮助流动，请将动物的头部置于心脏以下的位置。要止血，请吸干穿刺部位以实现止血并防止失血过多。最后，释放对 scruff 的压力，将动物放回笼子里。请注意，采集量会有所不同，但绝对不要超过存活血液采集的最大量。有关建议的最大采集量的详细信息，请参阅 Blood Withdrawal One 视频的文本方案。可以通过交替使用一侧来采集系列样品。任何一方的使用频率都不应超过每 5-7 天一次。

现在让我们回顾一下下颌下静脉出血法。虽然这与面部静脉出血的技术非常相似，但设备存在差异，出血程序存在细微差异。

下颌下静脉沿着小鼠的下颌延伸，并与面部静脉汇合到颈静脉。这种方法不是用柳叶刀，而是用针头来执行。但与采血针类似，针规的选择取决于动物的年龄、性别、体重和样本量 - 有关详细信息，请参阅文本协议。

首先，以与面部静脉出血相同的方式对动物进行擦伤，以便头部的左右运动最小。召回 - 握得太紧可能会减少采血量。在限制鼠标的同时，想象一条从嘴角穿过面部的线和一条来自眼睛外眦的线。这些线的交点是下颌下静脉的大致面积。这与在嘴角尾部和下颌线略下方发现的无毛小酒窝相吻合。

为了获得更好的准确性，请将动物置于侧卧位 （3.6.1）。接下来，将针头垂直于皮肤表面并用力推动插入。请勿将针头插入斜面尖端之外，因为插入深度大于此深度可能会导致头部、颈部和口腔中的肌肉、神经和其他血管受到创伤。拔掉针头后，血液会开始流淌。与面部静脉出血一样，将鼠标的头部置于低于心脏的位置，以帮助血液流动。最后，吸干穿刺部位以实现止血并释放对 scruff 的压力以将动物放回笼子。

现在，让我们学习如何从大隐静脉采集血液。这条静脉是一条浅表血管，向背侧延伸，然后横向穿过跗关节。

此过程所需的设备包括一个约束装置，它可以是用于大鼠的柔性塑料装置，或者对于小鼠，可以使用改良的 50 毫升塑料锥形管。请注意，管端被切掉以留出呼吸孔，并从帽端切出一个半英寸宽、2 英寸长的槽。边缘用凝块胶带覆盖，以确保动物的安全。该程序还需要止血带——使用 3 cc 注射器和 0-2 长度的不可吸收缝合线制造——带棉签的三重抗生素软膏——用作皮肤和血滴之间的防潮屏障、理发器、用于静脉穿刺的 22 号针头和用于采血的血细胞比容管。

要限制鼠标，请将其放入管中，先插入鼻子。然后，轻轻地将后腿引导到槽中，并用食指和拇指稳定它。随后，从跗关节到窒息剃掉腿部外侧的毛发。接下来，将一层非常薄的三联抗生素软膏涂抹到无毛区域。之后，将止血带尽可能贴在颅骨上并收紧。从膝盖到脚踝穿过外表面的隐静脉将开始充盈，并会变得凸起，易于观察。

接下来，将 22 号针头直接放在血管上并垂直于皮肤表面。并穿刺血管，注意不要将针头插入太深并刺穿肌肉或骨骼。血液会在腿部表面形成珠子，以便收集到血细胞比容管中。采集血液后，松开止血带并在穿刺处施加压力以止血。出血停止后，将动物从约束装置中取出，并将其放回笼子中。用这种方法收集的体积在 10 到 150 之间L，具体取决于采样频率。而且样品质量参差不齐，因为它可能含有纸巾产品。在24小时内，从同一条腿采集的血液样本不应超过4个。

最后，我们将学习如何从股静脉采集血液，这是大鼠采血的另一种选择。股静脉从腹股沟到膝关节，从后腿的内侧延伸到膝关节，然后穿过膝盖，成为外侧大隐静脉，使其易于接近。

股静脉出血的优点是比从大隐静脉出血更容易收集。缺点是，在有意识的动物中，这个过程需要两个人。该程序所需的设备类似于大隐静脉法，只是它不需要止血带，并且优选的约束装置是柔性锥体。要选择正确的锥体，请根据动物的体长进行测量，然后在大腿水平处切一个椭圆形孔。

要约束动物，请将其放入管子中，先用鼻子。然后，折叠蛋筒的末端并使用小活页夹将其关闭，以防止动物离开。现在将后腿拉过椭圆形开口以进入股静脉。不要握得太紧，因为它可能会加剧血肿的形成。接下来，从腹股沟到膝盖剃掉腿部的内表面，并在无毛区域涂抹一层薄薄的三重抗生素软膏。随后，约束者应闭塞股静脉，抓住大鼠，使腿内表面面向要抽血的人。将 22 号针头垂直于血管，直接刺穿静脉，将血液收集在血细胞比容管中，使其在皮肤表面形成珠子。穿刺应尽可能靠近膝盖，以便将来在该部位前方取样。此外，请确保穿刺深度不深于针头斜面的长度。为了帮助血液流动，将大鼠的腿置于低于心脏的位置。最后，释放腿部压力，对穿刺部位施加压力，以达到止血并防止失血过多。请注意，使用此程序可以收集更多的血液。

在讨论了采血技术的基础知识之后，让我们回顾一些例子，说明为什么这些程序可能对科学研究有用

在疫苗开发过程中经常分析血液以确认免疫反应。在这里，研究人员为患有膀胱癌的动物提供了一种肽疫苗。接下来，他们通过下颌下静脉采集血液并分离血清以检测不同细胞因子的水平，这些细胞因子是疫苗有效性的指标。

采血也通常通过研究人类疾病的生物标志物（如糖尿病的葡萄糖水平）来测试治疗效果。这些研究人员对测试一种通过尾静脉在糖尿病动物中传递的新型基因疗法的疗效感兴趣。注射后，这些研究人员在几个时间点从大隐静脉采集血液，以分析不同治疗方案对血糖水平的影响。

最后，对于某些实验，了解动物的基本状态很重要，例如炎症或压力的水平。在这个例子中，在应激事件之前和之后从大鼠身上收集血浆。正如你所看到的，动物的皮质酮或压力荷尔蒙水平在压力事件发生后 10 分钟更高。

您刚刚观看了 JoVE 关于小鼠和大鼠抽血技术的第二部分。看完这两个视频后，您应该更好地了解从这些动物采集血液的注意事项和程序，以及它们如何用于当今的生物医学研究。一如既往，感谢您的观看！