小鸡前OVO文化前OVO CAM含量:它是如何真正起作用

鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）是一个独特的，自然免疫缺陷的支持文化环境研究血管生成和肿瘤发生。此视频文章演示了在鸡的不同步骤前OVO企业文化，潜在的血管生成的物质和成功接种肿瘤细胞和组织上的CAM表面的应用程序。

大家好，我是 Susan Paa。我来自德国伯格埃森大学生理化学研究所生化内分泌学系。大家好，我是 Daniel Ze Basian Dole。

我和 Susan 来自同一个机构。大家好，我是来自伯格大学神经解剖学研究所的 Mann。我们将向您展示 CH X 培养和共生膜论文的真正工作原理。

那么，我们去实验室吧。在最近的大多数实验研究中，作为 Chico 膜的 CAM 是通过穿过蛋壳切开窗户来暴露的，并且实验是在 ova 中进行的，导致 CAM 的可访问性以及观察和照片记录效果的可能性受到严重限制。雏鸡胚胎的 X 卵培养物显著促进了 CAM 和雏鸡胚胎的可及性。

请查看跳动的心脏，以便轻松体内记录胚胎的影响和实验作。在我们的视频文章中，我们将逐步演示 X 卵培养物在大量科学问题中的成功应用。鸡蛋在带有移动托盘的培养箱中孵化。

在这里，您可以看到加热元件和托盘移动器每天连续旋转鸡蛋 12 次。在培养箱底部的塑料容器中加水，将湿度保持在 60%，孵化温度设置为 37.5 摄氏度，然后开始孵化。小心地从蛋壳上清除污垢、羽毛和排泄物，用乙醇或消毒剂机械擦拭鸡蛋，但是，这会显着降低胚胎的存活率。

鸡蛋水平放置在孵化器的移动托盘上。请确保各个鸡蛋之间保持足够的距离，以便启用自由旋转。孵化 72 小时后，将鸡蛋从孵化器中取出，并用铅笔标记胚胎所在的鸡蛋顶部。

由于胚胎在一定程度上抵抗旋转并保持在这里 为了获得更好的感觉，不宜使用手套敲碎鸡蛋，但应使用 70% 乙醇消毒双手。鸡蛋水平握住，顶部有一个铅笔标记，并在三角形磁力搅拌棒的边缘破裂为了在破裂过程中最大限度地控制力，弯头不应放在工作台上。重要的是，蛋壳和蛋膜在开裂过程中打开蛋清泄漏是蛋膜穿孔的安全标志。

鸡蛋放在靠近爱国者菜肴的底部。为避免在此初始打开过程中蛋清进一步泄漏，重要的是爱国者盘底部的蛋清仍与鸡蛋内部的其他部分相连。由于这导致鸡蛋内部产生真空，通过拇指和中指轻轻地对穿过裂缝的经络和鸡蛋的赤道施加压力，将蛋黄固定在适当的位置，因此可以调节真空和鸡蛋内容物的挤压。

然后可以将鸡蛋的内容物转移到培养皿中，蛋黄完好无损。如果轻轻提起鸡蛋并小心地分离蛋壳的两半，然后将产卵培养物放在托盘上，放回培养箱并保持在 37.5 至 38.2 摄氏度和 70% 湿度下。不需要供应二氧化碳或氧气。

如果使用盖子和培养皿之间有垫片的特殊 Patriot 培养皿以及带有通风格栅的培养箱，则应将通风格栅保持半开状态。高压灭菌器滤纸用作应用于凸轮的液体物质的支撑材料，因为它们似乎对凸轮的刺激最小。应用部位应位于胚胎和凸轮边界之间的中间位置，否则胚胎会阻碍透射光下效果的显微镜观察。

将过滤器放在凸轮上后，应立即使用这里的液体阿托品，以避免干燥。应每天重新应用额外剂量或缓冲液。当凸轮完全显影时，最多可以应用六个不同的样品，并且可以比较对单个凸轮环的效果 从 1 毫升移液器吸头切割时，应尽可能薄地切割，以减轻重量并避免凸轮压痕。

然后将环套在凸轮上，并将细胞移液到环中。Hamilton Microliter 注射器用 70% 乙醇冲洗数次，最后用无菌磷酸盐缓冲盐水或 PBS，微型注射器小心地填充准备好的细胞悬液，但用注射器针头快速穿透凸轮和眼层，并连续注射细胞悬液。针头应在眼睛中停留几秒钟，以避免注射的细胞悬液损失 通过泄漏检查 X Ovo。

将孵化三天的卵培养物用作肢芽供体。胚胎从相连的卵黄血管中解剖出来。通过切一个圆圈，使用小排水勺将胚胎转移到装有冷无菌 PBS 的培养皿中，并通过搅拌洗涤。

然后将胚胎转移到装满无菌 PBS 的新鲜培养皿中，并从周围的膜中释放出来，用细镊子小心地将它们撕开。用镊子尽可能靠近身体地分离肢芽，抓住并转移到 8 到 10 天大的寄主鸡的凸轮上。在所需的应用部位，用一大块镊子轻轻刮擦，选择性地对凸轮进行创伤。

然后抓住嫁接物并与镊子的另一块分层到凸轮上。牺牲的雌性老鼠被固定在棋盘上。腹壁沿中线切割 70% 乙醇润湿，皮瓣通过销钉横向固定。

从腹部取出，分离并转移到烧杯中。用冷 PBS。使用镊子小心地去除胚胎膜以进行演示。

这里显示了一个 16 天大的小鼠胚胎，以便更好地看到肢芽。只有获得最佳的接枝结果。但是，如果使用 10 至 13 天龄胚胎的肢芽，则剪掉肢芽或使用尽可能靠近身体的细镊子。

在所需的应用部位，用镊子轻轻刮擦 CAM 选择性地受到创伤。然后抓住肢芽并将其转移到 8 到 10 天大的寄主鸡的 CAM 中。将移植物放置在凸轮的一侧一两次，在那里没有最终的嫁接旨在去除多余的 PBS。

移植物理想地放置在血管肿瘤 Y 分叉附近的凸轮上。用无菌手术刀将活检切成 1 到 2 立方毫米的块。从活检表面取出材料会增加被肌肉或结缔组织污染的风险。

在所需的应用部位，CAM 通过轻柔的刮擦选择性地受到创伤。将活检样本核心的一块移植到 8 至 10 日龄的宿主鸡的 CAM 上。移植物理想地放置在靠近血管 Y 分叉处的凸轮上。

然后将移植物转移到 CAM 中，并附有最少的 PBS。可以施加轻微的压力以将移植物纵到凸轮的凹痕中。宿主 Chick 胚胎被斩首杀死。

通过圆形切割去除带有附着嫁接物的 CAM 并转移到充满 PBS 的培养皿中。除前一个附着部位外，从移植物上切下过多的 CAM。再次在所需的应用程序站点。

通过轻柔的刮擦选择性地对新宿主雏鸡胚胎的凸轮进行创伤，并将移植物转移到第二个宿主的凸轮上，并附着最少的 PBS。我们刚刚演示了 CH X 或文化的真正运作方式。我向您展示了与 Orval 实验相比的优势，并为您提供了一些应用示例。

就是这样。感谢您的观看，祝您的实验好运。