多电极阵列的犁鼻上皮录音

平面多电极阵列用于记录 UL 鼻器官。从小鼠中取出 VNO，使神经上皮保持完整。首先，从鼠标中取出 VNO 胶囊。

然后从骨包膜、血管和基底层中分离出神经上皮。将组织放置在 MEA 中，树突状旋钮面朝上。一旦这个设置完成，我们使用机械臂对组织进行液体刺激。

大家好，我是来自华盛顿大学医学院解剖学和神经生物学系 Tim Entirely 实验室的 Hannah Arnon。我是 Cheyenne Fu，也来自神圣实验室。今天，我们将向您展示 V 鼻器官的多电极阵列记录程序。

我们在实验室中使用该程序来研究辅助系统中的感觉特性或受体神经元。那么让我们开始吧。电记录是通过平面多电极阵列或 MEA 获得的，该 MEA 具有 10 微米扁平氮化钛电极，由氮化硅绝缘。

60 个电极排列在两个区域中，由一个 5 x 6 网格组成，中心间距为 30 微米。使用 MEA 10 60 放大器，电信号被放大。在 10 kHz 时需要 1000 倍信号。

使用数据采集卡和定制数据采集软件，组织被尼龙网压在 MEA 上，尼龙网连接到定制插入物上，紧贴在培养物内部。为了引入 MEA，现在我们已经看到了 MEA，让我们看看如何进行 VNO 解剖。在进行解剖之前，接下来用牛血清白蛋白或 BSA 填充 MEA 孔，使用温热的气泡林格溶液冲洗 MEA 并将其置于冰上。

为了准备解剖，用气泡振铃液填充两个 60 x 15 毫米的培养皿，然后将它们放在冰上。此外，用林格溶液填充两个相同大小的门槛护罩涂层培养皿，然后将它们放在冰上。再冷却 50 毫升起泡的环状物，以便在解剖过程中使用。

从牺牲的小鼠开始，从平行于下颌线的嘴侧到后脑勺做双侧切口。沿着脖子后部连接两个切口，去除头部的背面，留下下颌用细剪刀固定在老鼠身上。在组织和上颌骨的任一侧之间切开，将组织与骨骼分开。

接下来，用 3 号镊子剥下上颚组织，用小剪刀或手术刀在上两颗门牙之间和两侧剪开鼻腔，以使用 3 号镊子将脆弱的鼻囊从骨头中释放出来。通过扁平骨头捡起脆弱的鼻囊，并将其放入冰上的培养皿中。将 VNO 浸入冷藏振铃器中的上述步骤应在三分钟内完成。

为防止组织死亡，请将培养皿置于反射光照射的立体显微镜下。使用三把镊子一次从一个 VNO 中取出骨囊。用一只手从端抓住来稳定骨囊，另一只手从 VNO 上剥下骨头，注意不要损坏 VNO。

去除骨头后，将 v 和 o 转移到涂有雪茄的培养皿中。将剩余的培养皿用于另一个 VNO。使用微型剪刀将照明切换为使用透射光。

或者五号镊子。沿 VNO 的边缘切割，将 VNO 与血管分离。此时，您将使神经片与血管完全分离。

使用三号镊子将 VNO 内侧朝上放置。使用用夹子固定的特氟龙涂层剃须刀片的小碎片，将 VO 固定在组织一角的 S 防护装置上。从基底层剥离神经上皮，将刀片与培养皿表面成小于 30 度的浅角。

效果最好。使用玻璃移液器。将神经上皮片从培养皿转移到 MEA，将 VNO 放置在电极场的顶部，树突面朝上。

用移液管除去多余的林格溶液，然后将网状组织支架放入阵列的孔中以将 vno 固定到位。用冷冻的 ringer 溶液填充孔，解剖完成。让我们看看如何录制要开始录制，请将 MEA 放入 MEA 10 60 放大器中，并将加热器探头直接放置在组织上方，以确认加热器正确。

探针放置用含有 50 毫摩尔钾的林格溶液刺激 2 秒钟。调整位置以最大程度地减少神经反应对钾溶液的延迟。组织需要连续输血，这是通过从 HPLC 泵提供林格溶液来实现的。

在记录前 45 分钟到 1 小时，将组织与加热的林格溶液超级融合，以使组织适应。刺激物使用 Gilson 两个 15 液体处理器机械臂进行输送。它们通过向 HPLC 阀中执行进样并在流通和定量环之间切换来呈现在 Gilson 软件的控制下，机械臂将刺激输送到大量管线，同时保持恒定的流速和压力。

HPLC 阀的状态由电压表示，该电压由采集计算机记录为额外通道。为了确保与神经元活动同步，使用自定义记录软件将电信号保存到光盘中。现在我们将向您展示 VNO 多电极阵列的一些代表性结果。录音。

由于电极数量众多，该程序会产生大量数据，并且制备通常保持稳定约 6 小时。以下是来自一半 MEA 的 400 毫秒数据的示例。该程序可用于测量感觉神经元对配体的反应，此处显示的是记录的对从单个电极记录的 100 倍稀释雌性小鼠尿液的反应。

尿液输送 10 秒，如黑条所示。请注意，刺激物呈现后放电的增加。我们刚刚向您展示了在执行此过程时如何在鼠标 VNO 上执行多电阵列录音。

记住要有耐心很重要。就是这样。感谢您的观看，祝您的实验好运。