लार्वा रिंग ग्रंथि विच्छेदन: ड्रोसोफिला से विकासात्मक एंडोक्राइन अंगों का अलगाव

- रिंग ग्रंथि को विच्छेदन करने के लिए, आपको विच्छेदन माइक्रोस्कोप, दो संदंश, एक बारीक गेज सुई को विच्छेदन चाकू के रूप में काम करने के लिए, और एक बफर समाधान की आवश्यकता होगी। लार्वा के सिर की पहचान करके अंगूठी ग्रंथि का पता लगाएं, जिसमें मुंह के हुक होते हैं। मस्तिष्क को खोजने के लिए लार्वा की लंबाई के साथ यात्रा करें, जो छाती और पेट के वर्गों के बीच है। अंगूठी ग्रंथि मस्तिष्क से छोटी है और शीर्ष पर स्थित है।

लार्वा रिंग ग्रंथि एक जटिल एंडोक्राइन संरचना है जिसमें तीन अलग-अलग एंडोक्राइन अंग होते हैं। कॉर्पस अलाटम रिंग ग्रंथि के केंद्र में बैठता है और किशोर हार्मोन पैदा करता है, जो विकास और उम्र बढ़ने को नियंत्रित करता है। प्रोथोरेसिक ग्रंथि कॉर्पस अलाटम को घेरे हुए है और संरचना के बहुमत को बनाती है । Ecdysone, कीट माल्टिंग में शामिल एक हार्मोन, इस ग्रंथि द्वारा किया जाता है । प्रोथोरेसिक ग्रंथि के नीचे कॉर्पस कार्डियकम है, जो एक पोषक तत्व नियामक का उत्पादन करता है ।

इस उदाहरण में, हम इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के लिए लार्वा दिमाग और अंगूठी ग्रंथियों को विच्छेदन करेंगे।

- लार्वा तैयार करने के बाद, एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत पीबीएस से भरे तीन सेंटीमीटर पकवान में पाठ्यक्रम विच्छेदन शुरू करें। सबसे पहले, मुंह के हुक को संदंश के साथ पकड़ें। फिर, माइक्रो कैंची का उपयोग करके, पूर्वकाल टिप से लगभग एक तिहाई लंबाई में शरीर को तोड़ें। इसके बाद, पूर्वकाल की लंबाई को एक जोड़ी बल्प्स के साथ पकड़ें और सिर के टिप को धीरे से शरीर में धकेलने के लिए एक दूसरी जोड़ी का उपयोग करें।

10 मिनट के भीतर इस तरीके से 20 लार्वा तैयार करें और फिर उन्हें फिक्सिव सॉल्यूशन में ट्रांसफर करें। 30 मिनट के बाद, तैयारी को धोएं और इम्यूनोदाते हुए आगे बढ़ें। लार्वा को इम्यूनोदाता करने के बाद, नमूनों को 0.3% पीबीटी से भरे पकवान में स्थानांतरित करने के लिए डिस्पोजेबल पिपेट का उपयोग करें।

एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत, एक जोड़ी संदंश के साथ छल्ली या मुंह हुक पकड़ें। इसके बाद, घेघा और आंखों की डिस्क के पूर्वकाल टिप को काटकर शरीर के क्यूटिकल से मस्तिष्क-अंगूठी ग्रंथि-आंख डिस्क परिसर को हटाने के लिए चाकू की तरह एक मिलीलीटर सिरिंज से जुड़ी 27 गेज की सुई का उपयोग करें।

इसके बाद, संदंश का उपयोग करके, मस्तिष्क-रिंग ग्रंथि-आई डिस्क कॉम्प्लेक्स से घेघा और आंत को सावधानी से अलग करें। घेवर की ओर से आंत को बाहर खींचें, क्योंकि घेघा वेंट्रल तंत्रिका कॉर्ड के ऊपर मस्तिष्क से गुजरता है। अंत में, मस्तिष्क-अंगूठी ग्रंथि परिसर को अलग करने के लिए, ध्यान से मस्तिष्क डिस्क, आंखों की डिस्क और पैर डिस्क के बीच के कनेक्शन को चाकू के साथ काट लें।

- विच्छेदन के दौरान तेज किनारों के साथ ठीक संदंश का उपयोग करना काफी आवश्यक है। मैं यह भी दृढ़ता से सलाह देता हूं कि आप बिना किसी अंतराल के अपने किनारों को एक साथ लाने के लिए एक अरकंसास पीसने वाले पत्थर के साथ संदंश तेज करें।

- नमूनों को स्थानांतरित करने के लिए, एक विस्तृत बोर टिप के साथ एक माइक्रोपिपेट का उपयोग करें। नमूनों को कांच की स्लाइड के केंद्र पर जमा करें। फिर, नमूनों को उनके वेंट्रल साइड्स पर रखने के लिए संदंश का उपयोग करें ताकि अंगूठी ग्रंथि, जो मस्तिष्क के पृष्ठीय पक्ष पर स्थित हो, इमेजकिया जा सके । इसके बाद, स्लाइड को झुकाएं और जितना संभव हो अतिरिक्त पीबीटी को मिटा दें । फिर, नमूनों के पास बढ़ते रिएजेंट की एक बूंद डाल दिया और धीरे-धीरे रिएजेंट पर एक कवर कम करने के लिए फोर्सप्स का उपयोग करें, और फिर नमूनों पर।