Enriching the Lung Sample for T Cells via Magnetic Bead Enrichment

Name: Enriching the Lung Sample for T Cells via Magnetic Bead Enrichment
Uploaded: 2024-07-19T14:40:00+00:00
Duration: 2 min 19 s
Description: Enriching the Lung Sample for T Cells via Magnetic Bead Enrichment

doi:10.3791/201920

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免疫与感染

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通过磁珠富集富集肺部样品中的 T 细胞

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免疫与感染

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Enriching the Lung Sample for T Cells via Magnetic Bead Enrichment

通过磁珠富集富集肺部样品中的 T 细胞

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02:19 min

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July 19, 2024

DOI:

10.3791/201920-v

DOI:

10.3791/201920-v

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02:19 min

July 19, 2024

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Daniel S. Shin^1,2,3, Juliana Barreto de Albuquerque^1,3, James J. Moon^1,3,4

¹Center for Immunology and Inflammatory Diseases, Division of Rheumatology, Allergy, and Immunology,Massachusetts General Hospital, ²Division of Immunology,Boston Children’s Hospital, ³Harvard Medical School, ⁴Division of Pulmonary and Critical Care Medicine,Massachusetts General Hospital

成績單

首先，向分离的肺细胞中加入 50 微升抗小鼠 CD90.2 微珠。涡旋混合物后，在 4 摄氏度下孵育 10 分钟。接下来，将顺磁性细胞分离柱放在 1 位或 4 位细胞分离磁力架上。

在每根色谱柱下方放置一根开口的 15 mL 锥形管，以捕获流经。用 3 mL 冷分选缓冲液灌注色谱柱，使色谱柱在重力作用下排入下面的锥形管中。细胞与微珠孵育 10 分钟后，加入 1 mL 体积的冷分选缓冲液，然后将混合物转移至柱顶部的 100 μm 细胞过滤器中。

将色谱柱流过收集到放置在色谱柱下方的新鲜 15 mL 锥形管中。细胞悬液通过色谱柱完全排空后，向原始试管中再添加 3 mL 冷分选缓冲液，并通过网孔将其涂抹到色谱柱上，然后取下过滤器。当样品完全排空到色谱柱中，没有进一步的流出时，从磁力架上取下色谱柱，并将其放在新的 15 mL 锥形管上。

向色谱柱中加入 5 mL 冷分选缓冲液。要洗脱结合的细胞，以一个连续的运动向下推柱塞，迫使缓冲液从底部进入新管中。将洗脱的样品在 4 摄氏度下以 400 x g 离心 5 分钟。

小心吸出上清液，留下大约 100 μL 的上清液和细胞沉淀。平均而言，富集过程从肺部回收了 99% 以上的所有 CD90.2 阳性 T 细胞，纯度超过 90%。

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Lung Sample Enrichment T Cells Magnetic Bead Enrichment Anti-mouse CD90.2 Cell Separation Column Sorter Buffer Conical Tube Cell Strainer Flow Through Centrifuge Supernatant CD90.2 Positive T Cells Cell Pellet Enrichment Process

通过磁珠富集富集肺部样品中的 T 细胞

成績單

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