Staining the Antigen-Specific T Cells with Peptide:MHC Tetramers for Flow Cytometry Analysis and Sorting

Name: Staining the Antigen-Specific T Cells with Peptide:MHC Tetramers for Flow Cytometry Analysis and Sorting
Uploaded: 2024-07-19T14:40:00+00:00
Duration: 1 min 37 s
Description: Staining the Antigen-Specific T Cells with Peptide:MHC Tetramers for Flow Cytometry Analysis and Sorting

doi:10.3791/201921

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免疫与感染

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使用 Peptide：MHC 四聚体对抗原特异性 T 细胞进行染色，用于流式细胞术分析和分选

JoVE 杂志
免疫与感染

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JoVE 杂志免疫与感染

Staining the Antigen-Specific T Cells with Peptide:MHC Tetramers for Flow Cytometry Analysis and Sorting

使用 Peptide：MHC 四聚体对抗原特异性 T 细胞进行染色，用于流式细胞术分析和分选

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01:37 min

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July 19, 2024

DOI:

10.3791/201921-v

DOI:

10.3791/201921-v

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01:37 min

July 19, 2024

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Daniel S. Shin^1,2,3, Juliana Barreto de Albuquerque^1,3, James J. Moon^1,3,4

¹Center for Immunology and Inflammatory Diseases, Division of Rheumatology, Allergy, and Immunology,Massachusetts General Hospital, ²Division of Immunology,Boston Children’s Hospital, ³Harvard Medical School, ⁴Division of Pulmonary and Critical Care Medicine,Massachusetts General Hospital

成績單

富集肺部样品中的 T 细胞后，向每个样品中加入 1 毫升 10 毫摩尔达沙替尼。涡旋混合物，并在室温下孵育 5 分钟。添加 PE 或 APC 偶联肽 MHC 四聚体至终浓度为 10 纳摩尔。

涡旋混合物后，在室温下避光孵育 1 小时。当样品用肽 MHC 四聚体染色时，制备抗体预混液以对细胞表面标志物进行染色，四聚体染色孵育期还剩 15 分钟，加入 1 至 100 稀释度的表面抗体预混液。加入 50， 000 个流式细胞计数微珠和冷分选仪缓冲液，达到约 5 mL 的最终体积，然后加入冷分选仪缓冲液至 15 mL，并在 4 摄氏度下以 400 x g 离心试管 5 分钟。

小心吸出上清液，留下大约 100 μL 的上清液和细胞沉淀。现在，用额外的 200 μL 分选缓冲液重悬样品，并将其转移到 5 mL FACS 管中。