尾静脉注射:一种在小鼠模型中施用癌细胞进行转移研究的方法

首先将胰蛋白酶添加到含有标记乳腺癌细胞的培养皿中，以将它们从表面分离。加入含有血清的培养基以终止胰蛋白酶的作用。将细胞悬液转移到锥形管中，并离心使其沉淀细胞。

弃去上清液，将细胞重悬于磷酸盐缓冲盐水中。将试管放在冰上以减慢细胞新陈代谢。将含有所需细胞量的细胞悬液装入 Luer 锁注射器中，并将针头固定在其上。

将老鼠放在啮齿动物限制器中，尾巴在外面。将尾巴浸入温水中以扩张静脉。尾巴的侧面有两条静脉，腹侧有一条动脉。用酒精擦拭尾巴，插入针头，然后注射细胞悬液。

一旦进入血液，注射的癌细胞就会侵入器官，例如肺，并增殖。慢慢取下针头，在注射部位使用无菌纱布施加压力以止血。将鼠标放回笼子并确保完全恢复。在以下方案中，我们展示了将标记的转移癌细胞注射到小鼠模型中以量化乳腺癌转移和定植。

吸出培养基并用 1X PBS 冲洗细胞板。每 15 cm 板用 5 mL 胰蛋白酶胰蛋白酶对细胞进行胰蛋白酶消化 2 至 5 分钟，然后将所有细胞转移到锥形管中。用足够的完全生长培养基洗涤组织培养皿中的剩余细胞，以淬灭胰蛋白酶。将洗涤液加入同一锥形管中。使用自动细胞计数器对细胞进行计数以确定细胞总数。

接下来，将细胞以 122 倍 G 离心 3 分钟，然后吸出上清液。将细胞重悬于所需浓度的 1X PBS 中。在这里，将 25,000 个细胞注入每只小鼠的 100 微升 PBS 中，因此重悬细胞为每毫升 250,000 个细胞。将细胞悬液保持在冰上直至注射。

在动物设施的通风橱中工作，通过倒置试管或使用 1 毫升注射器轻轻但彻底地混合细胞，以确保它们均匀地重悬。现在，将细胞悬液装入 1 毫升 Luer lock 注射器并排出多余的气泡。将 1/2 英寸、30 号针头放在注射器上，斜面朝上，排出气泡。

轻轻地将鼠标放入啮齿动物限制器中。外侧尾静脉应可见并扩张。如果没有，轻轻捏住尾巴的根部，将尾巴浸入温自来水中以扩张静脉。使用酒精湿巾清洁尾巴。然后将针头插入尾静脉，斜面朝上，注射 100 微升细胞悬液。如果针头正确插入静脉，它应该很容易略微向前和向后滑动，推动柱塞时不应有阻力。

成功的注射还应该导致潮红，其中静脉的蓝色在注射后几秒钟内变为白色。慢慢取下针头，并使用无菌纱布对注射部位施加压力以止血。将鼠标放回笼子并监控 15 分钟，以确保完全恢复。