尾静脉注射：小鼠模型中用于转移性研究的癌细胞接种方法

首先，将胰蛋白酶加入含有标记乳腺癌细胞的培养皿中，以使细胞从表面脱落。随后加入含血清的培养基以终止胰蛋白酶的作用。将细胞悬液转移至锥形管中，离心以沉淀细胞。

弃去上清液，并将细胞重悬于磷酸盐缓冲液中。将离心管置于冰上以减缓细胞代谢。取含有所需数量细胞的细胞悬液，加入鲁尔锁式注射器中，并安装针头。

将小鼠放入固定器中，使其尾巴露在外面。将尾巴浸入温水中以扩张静脉。尾巴的两侧各有一条静脉，腹侧有一条动脉。用酒精擦拭尾巴，插入针头，注入细胞悬液。

一旦进入血液，注射的癌细胞便会侵入肺等器官并增殖。缓慢拔出针头，并用无菌纱布按压注射部位以止血。将小鼠放回笼中，确保其完全恢复。在以下实验方案中，我们将演示将标记的转移性癌细胞注射到小鼠模型中，以定量分析乳腺癌的转移和定植过程。

吸去培养基，并用1× PBS冲洗细胞培养板。每15厘米培养板加入5毫升胰蛋白酶消化细胞，作用2至5分钟，然后将所有细胞转移至锥形管中。用足量的完全生长培养基冲洗细胞培养皿中残留的细胞，以终止胰蛋白酶反应。将冲洗液加入同一锥形管中。使用自动细胞计数仪对细胞进行计数，以确定总细胞数量。

接下来，以122 × g离心细胞3分钟，吸除上清液。用1× PBS将细胞重悬至所需浓度。此处，每只小鼠注射25,000个细胞，溶于100 µL PBS中，因此细胞悬液浓度为250,000个细胞/毫升。细胞悬液在注射前需置于冰上保存。

在动物实验设施的通风橱内，通过倒置离心管或使用1毫升注射器轻轻而充分地混匀细胞，确保细胞均匀重悬。随后，用1毫升鲁尔锁式注射器吸取细胞悬液，并排出多余的气泡。在注射器上安装一支1/2英寸、30号针头，针尖斜面朝上，并排出残留的气泡。

将小鼠轻轻放入啮齿类动物固定器中，使侧尾静脉清晰可见并扩张。如果静脉不明显，可轻轻捏住尾根部，并将尾巴浸入温水中以扩张静脉。使用酒精棉片清洁尾巴。然后将针头斜面朝上刺入尾静脉，注入100 µL细胞悬液。若针头正确进入静脉，应能轻松前后滑动，且推动针栓时无明显阻力。

成功的注射还应引起血管发白现象，即注射后静脉的蓝色在数秒钟内变为白色。缓慢拔出针头，并用无菌纱布对注射部位施加压力，以止住任何出血。将小鼠放回笼中，并观察15分钟，确保其完全恢复。