超声引导植入:一种将胰腺导管腺癌细胞植入成年小鼠的技术

- 超声提供高分辨率图像，有助于将癌细胞植入特定组织部位，在肿瘤细胞注射过程中炎症最小。首先，我们使用原位模型将肿瘤细胞移植到肿瘤起源的相关器官中。该器官模仿原始肿瘤微环境并促进转移。

首先将肿瘤细胞悬浮在冷 PBS 中以保持 pH 值，并将试管置于冰上。接下来，将麻醉小鼠放在超声台上，并用实验室胶带固定四肢。在剃光的腹部涂抹所需量的超声凝胶，并调整超声探头位置，直到胰腺清晰可见。在注射器中装入肿瘤细胞悬液，然后小心地将细胞注射到胰腺中。

超声图像中出现一个液泡，确认植入成功。等待 5 秒以防止细胞回流并轻轻取出针头。将动物放回干净的笼子中并监测，直到它从麻醉中恢复。在注射后几周内，注射的胰腺癌细胞迅速分裂并形成肿瘤。在以下方案中，我们将进行超声引导下将小鼠来源的胰腺导管腺癌细胞植入原位模型的胰腺中。

- 在开始手术之前，将感兴趣的胰腺导管腺癌细胞系重悬于适当体积的冰上无菌冷 PBS 中。将笼子放在 37 摄氏度的加热板上，并用适当的消毒剂彻底清洁生物安全柜、诱导室和超声台。将超声阶段的加热功能设置为 37 摄氏度，麻醉诱导后，将软膏涂抹在第一只动物的眼睛上。

将小鼠背卧放在超声载物台上，并用胶带轻轻地将上肢和下肢固定在载物台上。使用无菌棉签涂抹器在腹部左上象限涂抹一层厚厚的脱毛霜，从脾脏区域到中线。1 分钟后，使用干燥的纱布垫轻轻去除毛发，然后用生理盐水湿纱布去除多余的脱毛膏。然后，将鼠标放入加热器上的一个新的干净笼

对于超声引导下的肿瘤细胞植入，调整超声平台，使表面与地板平行，并站在动物的左侧，小鼠的头部朝向右侧。调整换能器位置，以便获得腹部横向图像，并用胶带将小鼠肢体固定在平台上。轻轻降低换能器以接触小鼠腹部并调整换能器，直到胰腺清晰可见。找到左肾和脾脏，以提供腹腔的准确方向。

找到注射部位后，将 29 号半英寸胰岛素注射器中装有 25 微升肿瘤细胞悬液，并用无菌酒精制备垫擦拭针尖。使用钝边镊子抓住小鼠皮肤和腹膜壁，以增加注射部位的张力。将注射器与超声平台表面成大约 25 至 45 度角，缓慢地将针头穿过皮肤和腹膜壁。确认针头已刺穿腹膜壁，然后利用超声可视化将针头直接引导至胰腺。

针头就位后，慢慢注射肿瘤细胞。通过超声检查，在正确注射的胰腺中，胰腺内液体团块的形成将很明显。一旦注射了全体积的悬浮液，并且可以通过超声观察到液体推注，将注射器保持静止几秒钟，然后慢慢地从小鼠腹部缩回针头，注意不要干扰注射的细胞。然后，将鼠标放入加热器上一个新的干净笼子中，并进行监控，直到完全恢复。

- 在胰腺中正确放置针头，包括针头深度和角度，是该方案中的关键步骤。液体推注的可视化有助于确认肿瘤注射是否成功。控制注射深度是最困难的方面。我的建议是练习台盼蓝注射，并通过超声和尸检确认液体推注。