基于 siRNA 反向转染的体外基因沉默：一种在培养细胞中递送小干扰 RNA 以灭活靶基因表达的程序

要将小干扰 RNA 或 siRNA（一类双链 RNA）反向转染到非贴壁脂肪细胞或脂肪细胞中，制备靶向脂肪细胞中特定蛋白质编码基因的 siRNA 悬浮液。添加合适的阳离子脂质体转染试剂。孵育混合物，通过静电相互作用形成转染复合物。

将混合物转移到多孔板的胶原包被孔中。转染复合物通过非特异性相互作用固定在板包被上。将脂肪细胞悬浮液移液到含有固定转染复合物的孔中。脂肪细胞松散地粘附在板涂层上，增加了细胞和复合物之间的物理接触。

转染复合物融合到细胞膜上，并将 siRNA 递送到细胞质中。siRNA 由一条反义链组成，该链具有与靶标 mRNA 互补的序列和一条正义链，可被多蛋白 RNA 诱导沉默复合物 （RISC） 识别。siRNA 与 RISC 结合，链分离，反义链仍与复合物结合。

激活的 siRNA-RISC 复合物可识别并结合靶 mRNA 上的互补位点。这导致 RISC 复合物的 argonaute 蛋白对 mRNA 进行序列特异性切割。裂解的 mRNA 被细胞机制进一步降解，从而沉默靶基因表达。