定量 Western 印迹以估计蛋白质表达水平

定量蛋白质印迹法（一种基于总蛋白归一化的技术）可用于定量靶蛋白表达水平。

首先，将组织裂解物加载到聚丙烯酰胺梯度凝胶的孔中。裂解物包含靶蛋白以及其他细胞蛋白。

在适当的电压下运行凝胶，以便沿梯度对样品蛋白质进行电泳分离。完成后，将凝胶放在转印膜组的聚合物膜上。

施加电流将分离的蛋白质转移到膜上。接下来，将膜置于荧光总蛋白染色剂中。染色剂中带电的染料分子与膜上的所有蛋白质静电结合。

添加阻塞解决方案。因此，溶液中的蛋白质与膜结合。防止检测试剂的非特异性结合。添加仅与靶蛋白结合的一抗。然后，添加附着在一抗上的二抗（用荧光团标记）。

用激光激发样品。记录总蛋白染料的染料分子和抗体结合荧光团在其相应波长下发射的荧光。

要计算标准化蛋白质上样值，请将每个泳道的总蛋白质信号除以最大值。将靶蛋白信号除以相应的归一化上样值，以确定靶蛋白的相对表达。