用于确定细胞异质性的单细胞 western blotting

炎症部位包含各种免疫细胞，包括单核细胞、巨噬细胞和白细胞。

为了通过单细胞蛋白质印迹鉴定异质细胞群，取预水合的印迹芯片，该芯片由图案化成块的可光激活聚丙烯酰胺凝胶组成。每个模块都有许多微孔。图案化为多个块会并行捕获多个单元格。

添加含有异质细胞群的悬浮液。孔的尺寸允许单个细胞沉降。将芯片浸入装有适当缓冲液的电泳室中。缓冲液中的去污剂分子破坏细胞膜，释放出细胞内容物。

施加电场。释放的蛋白质在凝胶上迁移，分离成大小不同的条带。用洗涤缓冲液洗涤芯片以去除非特异性结合的分子，只留下细胞蛋白，包括所需的标记蛋白。

将凝胶暴露在紫外线下，激活其表面并固定蛋白质。

添加一抗混合物，这些一抗与每种细胞类型特有的标记蛋白特异性结合，形成蛋白质-一抗复合物。分配荧光标记的二抗混合物，这些二抗结合各自的一抗，标记相应的细胞特异性标记蛋白。

将芯片放入扫描仪中。测量荧光强度，该强度与样品细胞悬液的单个细胞特异性的相应蛋白质标记物的表达水平成正比。