用于蛋白质加工的化学发光 Western Blot 检测

CD95 — 一种死亡受体 — 与其激动性抗体结合，触发死亡诱导信号复合物或 DISC 的组装 — 一种募集 procaspase 8 的多蛋白复合物。在 DISC 中，procaspase 8 二聚化并加工形成各种中间切割产物，最后形成启动细胞凋亡的活性形式。

要使用化学发光蛋白质印迹分析 caspase-8 加工，请在试管中取出含有 caspase 8 的 DISC 相关中间切割产物的裂解物。用蛋白 A-琼脂糖珠捕获的抗 CD95 抗体补充。抗 CD95 抗体与 DISC 成分 ― CD95 结合，形成蛋白质复合物。

将样品上样到 SDS-聚丙烯酰胺凝胶上，以将不同大小的免疫沉淀 caspase 8 中间体分离为不同的条带。将凝胶放在印迹膜上，并施加电流。半胱天冬酶 8 中间体从凝胶中移出，落到印迹膜上。

用含封闭蛋白的封闭溶液处理膜，使蛋白质结合位点饱和 - 防止非特异性结合。

添加一抗溶液，该抗体在特定位点与 caspase-8 产物结合。

添加特异性结合一抗互补 Fc 区的酶标记二抗，形成 caspase-8 切割产物-一抗-二抗复合物。

添加化学发光底物，该底物与二抗偶联酶反应并发光。发射光的强度与 caspase-8 切割产物的数量相关。