定量斑点印迹法，用于估计组织裂解物中的靶蛋白

在此过程中，将一个空的移液器吸头盒放在 QDB 板下方，以避免板底部接触桌面。将最多 2 μL 的样品加载到 QDB 板单个单元底部的膜中心。

加载时，切勿让 QDB 板的底部接触任何表面，并且不要为单个孔加载太多。您的体验每孔不超过 4 微升。

接下来，将加载的 QDB 板在室温下放置 1 小时，或将加载的板在 37 摄氏度下放置 15 分钟，置于通风良好的空间内。要封闭板，请将 QDB 板浸入转印缓冲液中，然后轻轻摇晃 10 秒钟。

之后，用 TBST 轻轻冲洗 QDB 板 3 次，然后在 TBST 中不断摇晃洗涤板 5 分钟。随后，在不断摇动下用封闭缓冲液封闭 QDB 板 1 小时。现在，在封闭缓冲液中以选定的浓度稀释一抗，并向普通 96 孔板的每个孔中加入 100 μL。

将 QDB 板插入 96 孔板中，将组合板在室温下孵育 2 小时，或在 4 摄氏度下持续摇动孵育过夜。之后，用 TBST 轻轻冲洗板 3 次，然后用 TBST 洗涤 3 次 - 每次在不断摇晃下清洗 5 分钟。

接下来，在封闭缓冲液中以所选浓度稀释二抗，并将 100 μL 分装到 96 孔板的每个孔中。然后，在室温下将 QDB 板在加载的 96 孔板内不断摇动孵育 1 小时。用 TBST 轻轻冲洗 QDB 板 3 次，然后用 TBST 在不断摇晃下洗涤板 3 次，每次 5 分钟。

对于定量，制备 ECL 底物并以每孔 100 微升的浓度分装到 96 孔板中。然后，将 QDB 板插入 96 孔板内，在不断摇动下放置 2 分钟。之后，从 96 孔板中取出 QDB 板并短暂摇晃以去除多余的液体。随后，将板放在白色微量滴定板上。接下来，打开酶标仪并在用户界面上选择带盖板，然后将组合板放入酶标仪中进行定量。