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癌症研究
0 次观看 • 3:18 分钟 • April 30th, 2023
大网膜是腹膜腔内富含脂肪的组织，其脂肪储存库为转移性癌细胞定植并形成继发性肿瘤提供了适宜的微环境。为了在体外研究这种定植过程，首先将可渗透的膜性细胞培养小室置于培养板内。
在插入膜的内侧区域涂抹组织粘合剂。将小鼠网膜外植体置于粘合剂上以固定组织。轻轻将荧光标记的卵巢癌细胞悬液接种于网膜表面。
接下来，用适当的培养基填充小室的侧边以促进细胞生长，并在所需时间内进行培养。大网膜组织含有称为乳斑的特殊结构，这些结构是由围绕血管网络聚集的免疫细胞簇组成。这些免疫细胞会分泌某些化学因子，吸引癌细胞并促进其植入。定植的癌细胞随之增殖，模拟转移性条件。
最后，弃去用过的培养基。使用荧光显微镜观察培养物，以评估网膜组织内荧光标记的癌细胞克隆。
培养并制备荧光标记的细胞，重悬于浓度为每毫升200万个细胞的溶液中。取约6微升组织粘合剂涂抹于培养插件的膜上，静置使其自然风干。随后，用无菌水洗涤膜两次，以去除多余的粘合剂，然后在层流罩下将膜风干。
使用无菌镊子小心切除大网膜，并将其贴附到涂有黏合剂的膜上。待组织在膜上黏附一分钟后，在每个培养插件中的每个大网膜上方加入 500 µL 细胞悬液。
然后，向 transwell 小室周围加入 2.5 毫升 DME/F-12 培养基。将大网膜与细胞悬液在 37 摄氏度、5% CO2 环境中孵育 6 小时。小心取出大网膜，并用约 10 毫升 PBS 洗涤。最后，使用适当的荧光成像系统观察荧光标记的癌细胞病灶。