糖原分支程度测定实验

支链多糖（如糖原）由以线性方式连接的葡萄糖残基组成 通过 α-1,4-糖苷键及分支结构 通过 α-1,6-糖苷键

为了测定多糖的支化程度，首先准备一种含有碘化钾、碘和氯化钙的水性显色试剂。在水相条件下，碘化钾与碘反应生成碘离子。

在不同的微量离心管中，将试剂与已知分支结构的多糖以及一个结构未表征的糖原样品混合。

多糖采用螺旋结构 通过 其α-1,4-糖苷键。碘离子与该螺旋核心结合，形成线性多碘链。这导致多糖与多碘链之间发生电荷转移复合物的形成，从而产生有色的多糖-碘复合物。

直链多糖与较长的多碘链结合会呈现蓝色，而支链多糖与较短的多碘链结合则形成黄至橙棕色的复合物。试剂中的氯化钙可增强复合物的颜色。

将混合物转移至一次性比色皿中。使用分光光度计，测定330至800纳米范围内的吸收光谱。

无分支的复合物呈蓝色，可吸收较长波长的光，表明其吸收峰向长波方向移动。相比之下，有分支的复合物吸收较短波长的光，吸收峰向短波方向移动表明其结构中分支程度更高。

未表征糖原样品在约 450 纳米处的吸收峰证实了其支链结构。

为测定糖原分支情况，取650微升碘/氯化钙显色剂储备液与100微升水加入1.5毫升离心管中，充分混匀后转移至一次性甲基丙烯酸甲酯比色皿。将比色皿放入分光光度计中，在330至800纳米波长范围内进行扫描，采集背景光谱。

在另一个1.5毫升离心管中，将650 µL工作碘/氯化钙显色试剂与50 µg牡蛎糖原混合，并用水定容至终体积750 µL。充分混匀后，将溶液转移至一次性甲基丙烯酸甲酯比色皿中，采集330至800纳米范围的吸收光谱。

同样，按照之前所述方法，使用 50 微克淀粉粒和 30 微克淀粉素获取吸收光谱。

为了获得未表征糖原样品支链结构的指示信息，将25至50微克糖原与650微升工作浓度的碘/氯化钙显色试剂混合，并按照前述方法操作以获取吸收光谱。