糖原支化测定法，用于测量糖原支化的程度

支链多糖，如糖原，包括通过 α-1,4-糖苷键线性连接的葡萄糖残基和通过 α-1,6-糖苷键在分支中连接的葡萄糖残基。

要确定多糖中的支化程度，请从含有碘化钾、碘和氯化钙的水性彩色试剂开始。在水条件下，碘化钾和碘产生碘离子。

在单独的微量离心管中，将试剂与已知分支结构的多糖和具有未表征结构的糖原样品混合。

多糖通过其 α-1,4-糖苷键采用螺旋结构。碘离子与该螺旋核心结合，形成线性多碘化物链。这导致多糖和多碘链之间形成电荷转移络合物，从而产生有色多糖-碘化物络合物。

具有较长聚碘链的无支链多糖呈蓝色，而具有较短聚碘链的支链多糖呈黄棕色至橙棕色络合物。试剂中的氯化钙会增强复杂的颜色。

混合物转移到一次性比色皿中。使用分光光度计测量 330 至 800 纳米的吸光度光谱。

的无支化络合物吸收较长波长的光，表明吸光度最大值向右移动。相反，支化配合物吸收波长较短的光，吸光度最大值的左移表明结构中的分支较高。

未表征的糖原样品在大约 450 纳米处的吸光度最大值证实了其支链结构。

为了确定糖原支化，将 650 微升碘/氯化钙色试剂储备液与 100 微升水混合在 1.5 毫升管中，并将溶液充分混合，然后转移到一次性甲基丙烯酸酯比色皿中。将比色皿放入分光光度计中，以波长扫描模式进行运行，以收集330至800纳米的背景光谱。

在单独的 1.5 毫升管中，将 650 微升工作碘/氯化钙色试剂与 50 微克牡蛎糖原混合，并用水将最终体积制成 750 微升。彻底混合混合物后，将溶液转移到一次性甲基丙烯酸酯比色皿中，以收集 330 至 800 纳米的吸收光谱。

类似地，如前所述，获得含有 50 微克支链淀粉和 30 微克直链淀粉的吸收光谱。

为了获得未表征糖原样品的支链结构的指示，将 25 至 50 微克糖原与 650 微升工作碘/氯化钙色试剂混合，并按照前面的解释进行以获得吸收光谱。