一种用于追踪病毒感染的荧光素酶荧光报告性流感病毒

从致病性重组流感病毒开始，其基因组经过修饰以包含致密报告基因。

这些报告基因编码一种小荧光素酶生物发光酶和一种单体荧光蛋白。

病毒鼻内接种到麻醉的小鼠中，适当剃须以进行后续成像。

病毒进入宿主细胞并释放其遗传内容。

在细胞核内，病毒基因组转录成 mRNA 分子，随后翻译成宿主细胞中产生荧光素酶和荧光蛋白。

荧光素底物在眼眶后注射到小鼠体内。

荧光素酶将荧光素氧化为氧荧光素，氧荧光素在弛豫时发出生物发光信号。

测量信号以估计荧光素酶水平，从而能够监测活体动物的病毒感染。

对于离体分析，切除肺部并通过合适的成像技术捕获荧光信号。

与常规变体不同，单体荧光蛋白不形成聚集体，从而产生清晰的图像以准确跟踪病毒感染。

要感染小鼠，首先在 1X PBS 中制备禽流感。将病毒放在冰上直到接种。检查是否没有脚趾捏反射，以确保小鼠被麻醉，并用准备好的禽流感稀释液鼻内接种。在将所有小鼠放回笼子之前，确保所有小鼠呼吸正常。

打开成像软件并按初始化，然后设置将用于成像的参数。要监测感染禽流感的小鼠，请剃掉它们的胸部毛，以提高对生物发光信号的检测。

鼠麻醉后，使用22号针头在PBS中稀释1至100微升NLuc荧光素酶底物在眶后施用。注射后，立即将动物置于隔离室中，胸部朝上，然后将隔离室放入成像仪器中，关上门，获取图像。

成像后，将小鼠放回笼子里，并监测它们，直到它们完全康复。使用成像软件 ROI 工具通过指定感兴趣区域并单击测量来分析获取的生物发光数据。

要对小鼠肺进行离体成像，请根据手稿说明收集肺，启动图像采集软件，并设置成像参数。机器初始化后，将肺部放入黑色背景托盘中，并确保组织彼此分开。将托盘引入成像仪，关上门，然后获取图像。

成像后，如果样品将在同一天处理，请立即取出组织并将它们储存在 4 摄氏度的冰上。如果稍后要处理，请将它们快速冷冻在干冰上的管中，并将它们储存在零下 80 摄氏度。要处理图像，请选择 ROI 工具，在每个单独的肺周围绘制感兴趣区域，然后单击测量。