共培养谷氨酸能神经元与儿童高级别胶质瘤细胞

从一个带有聚合物涂层的微流控装置开始，该装置包含由通道连接的储液井，并充满培养基。

从储液槽中移除培养基，并接种人诱导性多能干细胞。

细胞进入通道并黏附于包被的表面。

现在，用分化培养基填充储液槽。

培养基中的生长因子诱导干细胞分化为神经前体细胞。

接下来，加入含有特定营养物质和神经营养因子的培养基，以诱导神经前体细胞成熟为谷氨酸能神经元。

这些神经元从其轴突末梢释放兴奋性神经递质谷氨酸，谷氨酸与突触后神经元受体结合，产生兴奋性信号。

现在，取自侵袭性脑肿瘤的儿童高级别胶质瘤细胞，即来源于此类恶性肿瘤的癌细胞。

将细胞加入储液池中并进行孵育。胶质瘤细胞会进入通道并贴壁。

这些细胞逐渐与谷氨酸能神经元形成功能性突触，促进神经元-胶质瘤细胞间的相互作用，并导致神经元过度活跃。

开始培养商业化的人iPS来源的皮层谷氨酸能神经元时，用移液器抽吸微流控装置的入口和出口储液池，使仅有装置的通道内充满培养基。

通过在培养基中加入每毫升含650万个iPS细胞的10微升细胞悬液来接种人iPS细胞，并将装置置于超净台中静置15分钟，以使细胞贴壁。15分钟后，向进样口和出样口储液池中各加入50微升第4天培养基。随后将装置转移至培养箱中，在37摄氏度、5%二氧化碳条件下培养23天。每3至4天更换一次培养基，具体操作如文中所述。

使用标准相差显微镜对细胞进行计数并评估其活力，在第4天、第21天和第23天拍摄显微图像。将UW-479和BT-35两种细胞系培养于添加10%胎牛血清的DMEM和F-12 glutamax培养基中，在细胞培养瓶中进行培养。整个实验过程中，在37摄氏度、常氧条件下维持细胞培养环境。观察每种细胞系的生长，直至达到80%融合度。

在谷氨酸能神经元培养后的第21天，通过胰蛋白酶消化UW-479和BT-35细胞，开始共培养。将消化后的UW-479和BT-35细胞接种至各专用微流控装置中已成熟的贴壁谷氨酸能神经元上层。

在37摄氏度、5%二氧化碳的受控环境中，使用谷氨酸能神经元D11及后续培养基共同培养两天。使用显微镜图像并通过图像分析软件分析，对儿童高级别胶质瘤细胞进行计数，以评估其活力并计算细胞百分比。