斑马鱼胚胎原代视网膜神经节细胞培养物的产生

从胚胎培养基中的早期发育阶段斑马鱼胚胎开始。

去除绒毛膜，胚胎周围的保护膜，并将胚胎转移到含有培养基的新鲜培养板中。

取出胚胎的尾部，然后将头部分开，轻轻地将眼睛从头部上分离。

眼睛包含视网膜，这是一层薄薄的组织，容纳视网膜神经节细胞。

将眼睛转移到装有斑马鱼细胞培养基的管中。

机械解离眼睛以释放视网膜神经节细胞并形成单细胞悬浮液。

取盖玻片，放入装有斑马鱼培养基的培养板中。

盖玻片涂有合成聚合物和粘附蛋白。

细胞转移到盖玻片的中心并孵育。

视网膜神经节细胞附着在涂层表面上，此外，这些细胞会发育出称为轴突的长突起。

培养箱中取出斑马鱼胚胎，将胚胎浸入含有70%乙醇的35毫米组织培养皿中，5至10秒以进行灭菌。使用转移移液器，将胚胎转移到含有无菌 E2 培养基的 E2 培养基 #1 培养皿中，以洗掉多余的乙醇。然后，将胚胎转移到 E2 培养基 #2 培养皿中，并用锋利的镊子去除绒毛膜。最后，将胚胎转移到 E2 培养基 #3 培养皿中进行解剖。

使用一对细镊子，用其中一个镊子将胚胎定位并固定在卵黄的前面，然后用其他镊子去除卵黄囊后面的尾巴。用镊子抓住颈部并取下头部，使大脑和眼睛暴露在 E2 介质下。用细镊子的尖端，轻轻地从头部转动眼睛，同时用第二个镊子按住颅骨组织。将四只眼睛转移到先前准备好的含有ZFCM +的试管之一。

用P20移液器轻轻上下研磨约45次以解离细胞。将带有解离细胞的ZFCM +转移到盖玻片的中心。将培养物保持在 22 摄氏度的台面上，在聚苯乙烯泡沫架上以吸收振动。在成像当天，在显微镜下检查细胞以验证 RGC 轴突的生长。