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从无血清培养基中的背根神经节或DRG组织开始。DRG 组织包含嵌入细胞外基质 ECM 中的感觉神经元和卫星神经胶质细胞。
将它们接种到涂有凝胶状蛋白质混合物的培养皿上，以增强组织粘附力。
随着时间的推移，神经胶质细胞释放神经营养生长因子，允许神经元延伸，建立 DRG 外植体培养物。
要开发解离的细胞培养物，请将这些DRG外植体放入管中。用胶原酶处理它们以降解 ECM，然后用胰蛋白酶处理它们，胰蛋白酶会破坏细胞连接，释放神经元和神经胶质细胞。
加入富含血清的培养基以停止酶促反应。
反复移液内容物以形成单细胞悬浮液，并过滤以去除碎屑。
离心该细胞悬液并除去含酶的上清液。
将细胞重悬于神经基底培养基中，并将它们转移到层粘连蛋白包被的板上。
卫星神经胶质细胞和感觉神经元粘附在层粘连蛋白包被的板上，建立解离的细胞培养物。
将每个DRG转移到干燥的玻璃培养皿中。在手术显微镜下，使用刀片清洁并修剪掉仍附着在 DRG 上的多余纤维和结缔组织。DRG 很容易识别为沿着白色脊神经的凸起、透明结构，并且经常在 DRG 周围发现血管。
之后，将清洁后的DRG放入装有冰冷、无血清培养基的新培养皿中。在冰冷的无血清培养基中以 1 比 1 的比例稀释凝胶状蛋白质混合物。然后，将 DRG 离体接种在 12 孔板中，预涂有 10 或 20 微升凝胶状蛋白质混合物，并将它们保持在 37 摄氏度 30 至 60 分钟。
现在，向培养系统中轻轻加入1.5至2毫升无血清培养基，以覆盖整个外植体并将外植体保持在培养条件下。每 72 小时更换一次 DRG 生长培养基。并让 DRG 根据需要增长。
这是一个关键步骤，因为 DRG 使用凝胶状蛋白质混合物锚定在玻璃板上。因此，聚合时间和移液技巧对于避免漂浮至关重要。
在此过程中，将收集的所有DRG放入装有含有胶原酶IV的F12培养基的1.5毫升无菌管中，并在37摄氏度下孵育45分钟。然后，更换含有胶原酶IV的新鲜培养基，并将样品再孵育45分钟。然后，用2毫升含有0.025%胰蛋白酶的F12培养基在37摄氏度下处理外植体30分钟。
胶原酶IV处理后，立即将它们与2毫升含有胎牛血清的F12培养基在37摄氏度下孵育15分钟。然后，用2毫升F12培养基洗涤外植体三次，然后用玻璃移液器机械解离它们，直到培养基变得浑浊。
之后，通过 0.22 微米过滤器过滤解离的细胞培养物，以去除任何杂质和多余的结缔组织。然后，将过滤后的细胞裂解物离心两分钟。除去上清液并将细胞沉淀重悬于 500 微升神经基础培养基中。将解离的细胞以优选的细胞密度置于层粘连蛋白包被的载玻片上。
