雪旺细胞与 DRG 神经元在预拉伸膜上的共培养

0 次观看3:44 分钟 • July 8th, 2025

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取一个连接到基质涂层拉伸硅膜的硅室。

加入背根神经节或DRG细胞悬液并孵育。

基质促进细胞附着和繁殖,而拉伸的表面引导轴突对齐。

添加生长抑制剂,消除活跃分裂的神经胶质细胞,使非分裂神经元存活。

取出培养基。加入生长培养基并孵育。

神经元感知到拉伸方向上的膜刚度增加,并相应地调整轴突生长的方向。

将培养和收获的雪旺细胞加入DRG培养物中并孵育。

雪旺细胞附着在再生的轴突上,使神经元绝缘。

这增强了神经元的存活和功能,建立了共培养。

接种DRG神经元之前,从腔室中取出PLL溶液。用无菌水冲洗 PDMS 表面并风干。重悬细胞后,让悬浮液静置 1 至 2 分钟,让碎片沉淀到管底。接下来,将 1.5 毫升细胞悬液加入每个拉伸室中,并在 37 摄氏度下与 5% CO2 孵育。

要在体外一天内消除神经胶质细胞,请向每个孔中加入 10 微升或 15 微升 FdU/U 混合储备溶液。7小时后,用新鲜的标准生长培养基替换该培养基,并将预拉伸的培养装置置于37摄氏度的培养箱中,在5%CO2中。在细胞培养期间,每两天更换一次培养基,用新鲜培养基替换一半用过的培养基。

在此过程中,从雪旺细胞中取出培养基,并将 5 毫升 0.05% 胰蛋白酶-EDTA 加入烧瓶中。将细胞在 37 摄氏度下在 5% CO2 中孵育 2 至 3 分钟。使用 10 倍物镜在光学显微镜下检查细胞,看看它们是否从烧瓶中抬起。然后,将 5 毫升培养基加入烧瓶中的细胞中,并混合。

随后,将细胞悬液加入15毫升离心管中,在20摄氏度下离心5分钟。然后,除去上清液并将沉淀重悬于 7 毫升标准 DOG 生长培养基中。接下来,将 10 微升细胞悬液转移到 0.5 毫升微量离心管中。将其与 10 微升台盼蓝混合,然后使用 10 倍物镜用血细胞计数器计数细胞数。

加入生长培养基,将细胞悬液稀释至每毫升5,000个细胞。接下来,从拉伸室中的DRG培养物中取出0.5毫升培养基,并将0.5毫升雪旺细胞悬液加入DRG培养物中。在 37 摄氏度下在 5% CO2 中培养细胞一周。每两天更换一次培养基,用新鲜的标准生长培养基替换一半用过的培养基。

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最后更新:1 八月 2026