小鼠视网膜切片神经元中的光诱发突触后反应

暗室的记录室内取一块适应暗色的小鼠视网膜切片。视网膜位于盖玻片上的支撑性人工底座上。用 aCSF 灌注切片。

视网膜神经网络包括与神经节细胞突触的双极细胞突触相连的光感受器。

将记录移液器放置在视网膜附近。

在显微镜下，在接近目标神经节细胞时施加正压。

切换到负压以拉入膜贴片，然后将其破裂以建立与细胞质的连续性。

在黑暗中，感光膜保持去极化状态，导致神经递质释放。

与双极细胞受体结合的神经递质会触发阳离子通道闭合，抑制信号传递。

施加光脉冲使感光器超极化。神经递质释放的减少会触发双极细胞的阳离子通道打开。

阳离子流入诱导神经递质释放，与神经节细胞受体结合，产生移液器记录的兴奋性突触后电位。

对于膜片钳记录，用艾姆斯培养基灌注灌注管，让所有气泡从管中排出。用玻璃拉拔器制作记录移液器后，用移液器溶液回装吸头。接下来，使用微量移液器填充约三分之一的移液器。装满后，将每个移液器存放在潮湿的移液器盒中。

接下来，打开膜片钳记录设备，包括计算机、放大器、CCD 相机和显微镜。在黑暗条件下工作，在红外观察器的帮助下将视网膜切片制备物放在显微镜载物台上。固定后，开始连续灌注。

将灌注温度设置为 33 至 37 摄氏度。使用 CCD 相机查看切片表面。专注于目标细胞类型所在的目标位置。选择一个看起来健康的细胞进行膜片钳记录。一旦识别出健康细胞，将记录移液器放入移液器支架中，并将移液器推进到切片制备处。

当它接近切片制备时，用显微镜找到移液器的尖端。一旦移液器吸头在显微镜下可见，将吸头向下移向目标细胞。接下来，设置放大器，并将移液器调整为每纳安 5 伏皮安。启动两个大约 5 毫伏和大约 10 赫兹的连续电脉冲，并检查移液器电阻。

大多数视网膜神经元来说，理想的电阻在 5 到 12 兆欧之间。准备好后，使用吹嘴或注射器吹出内部溶液，直到移液器的尖端位于靶细胞的表面。当正压在细胞表面形成一个小凹坑时，稍微推进尖端并停止吹出。

如果移液器电阻不断增加，请离开它并监测电阻，直到它达到大于 1 吉欧姆。如果电阻没有自发增加，请轻轻施加负压，直到它变成千兆密封。实现千兆密封后，将保持电位更改为负 70 毫伏。

然后，间歇性施加负压以破裂移液器吸头内的膜。当进行全电池配置时，移液器电阻可以在 500 兆欧姆到 1 吉欧姆之间，并且可以观察到电容电流。记录负 80 至 40 毫伏的 I-V 关系。根据电池类型，将激活不同类型的电压门控通道。最后，记录光诱发的突触电流或电压。