小鼠视网膜切片中神经元的光诱发突触后反应

在暗室中将一只经过暗适应的小鼠视网膜切片置于记录 chamber 内。视网膜放置在覆盖于盖玻片上的支撑性人工基底上。用 aCSF 灌注切片。

视网膜神经网络包括光感受器，这些光感受器通过突触与双极细胞相连，而双极细胞又与神经节细胞形成突触连接。

将记录电极置于视网膜附近。

在显微镜下，接近目标神经节细胞时施加正压。

切换至负压以吸入膜片，随后使其破裂，从而与细胞质建立连续性。

在黑暗中，感光细胞膜保持去极化状态，从而导致神经递质的释放。

神经递质与双极细胞受体结合，引发阳离子通道关闭，从而抑制信号传递。

施加一个光脉冲以使感光细胞超极化。神经递质释放减少会触发双极细胞中的阳离子通道开放。

阳离子内流诱导神经递质释放，神经递质与神经节细胞受体结合， 产生由移液管记录到的兴奋性突触后电位。

进行膜片钳记录时，先用艾姆斯培养基对灌流管路进行预处理，并确保管路中所有气泡完全排出。使用玻璃微电极拉制仪制备记录电极后，用移液电极液从尖端回填电极。接着，使用微电极填充装置将电极约三分之一部分填充溶液。填充完成后，将每根电极存放于湿润的电极盒中。

接下来，开启用于膜片钳记录的设备，包括计算机、放大器、CCD相机和显微镜。在暗环境下，借助红外观察仪将视网膜切片标本放置于显微镜载物台上。固定标本后，开始持续灌流。

将灌流温度设置为 33 至 37 摄氏度。使用 CCD 相机观察脑片表面。聚焦于目标细胞类型所在的目标位置。选择一个形态健康的细胞进行膜片钳记录。一旦确定了健康细胞，将记录电极放入电极夹持器中，并将电极推进至脑片制备区域。

当接近切片制备时，使用显微镜找到移液管的尖端。一旦在显微镜下可见移液管尖端，将尖端向下移动至目标细胞。接着，设置放大器，并将移液管调节至每纳安5伏特的皮安档位。开始施加两个连续的电脉冲，幅度约为5毫伏，频率约为10赫兹，并检测移液管的电阻。

对于大多数视网膜神经元而言，理想的电阻应在5至12兆欧之间。准备就绪后，使用吹管或注射器吹出内部溶液，直至移液管尖端到达目标细胞表面。当正压在细胞表面形成微小凹陷时，轻微推进尖端并停止吹出。

如果移液管电阻持续增加，请保持不动并监测电阻，直至其达到1吉欧以上。如果电阻未自发增加，可轻轻施加负压，直至形成吉欧封接。形成吉欧封接后，将钳制电位调整为负70毫伏。

然后，间歇施加负压以破裂移液管尖端内的膜。当形成全细胞构型后，移液管电阻可在500兆欧至1吉欧之间，并可观测到电容电流。记录从负80至40毫伏的电流-电压（I-V）关系。根据细胞类型的不同，会激活不同类型的电压门控通道。最后，记录光诱发的突触电流或电压。