研究农药对秀丽隐杆线虫神经元的影响

从含有转基因秀丽隐杆线虫的琼脂平板开始，该蛋白在其神经元中表达绿色荧光蛋白或GFP。

盘子中加入无菌水，旋转以提起蠕虫，然后将它们转移到管中。

让蠕虫沉淀下来，然后去除多余的水并重新悬浮它们。

重悬的蠕虫转移到涂有农药的板和不含农药的对照板中，然后孵育。

它们的作用，该农药会特异性损害某些神经元并引起神经元肿胀，从而降低 GFP 表达。

将蠕虫转移到含有麻醉剂的琼脂糖垫上，然后放置盖玻片。

载玻片安装在荧光显微镜上。首先，使用相差模式可视化蠕虫，然后切换到荧光模式。

在经过杀虫剂处理的蠕虫中，神经元表现出荧光降低、体细胞肿胀和神经元突起间隙，表明神经退行性作用。

在控制状态下，健康的神经元显示出完整的体细胞，并发出明亮的荧光。

使用微量移液器放置，将 1 毫升无菌水放在线虫板上。接下来，将水搅动以抬起线虫。然后，将带有线虫的液体取出到 1.5 毫升微量离心管中。10 分钟后，当线虫在重力作用下沉降时，小心地除去至少 500 微升的水并丢弃。

然后，重悬线虫，并使用切断的黄色移液器吸头，将 50 至 100 微升悬浮的蠕虫去除到每个处理板中，确保每个板至少有 10 只成虫。通过仅在载玻片的一侧放置一块标签胶带来准备两张载玻片，以形成厚度均匀的垫子。

然后，在台面上的它们之间放置一个干净的、未使用的幻灯片。使用微量移液器将一滴 10 微升融化的琼脂糖滴在载玻片的中心。然后，通过将另一张干净的载玻片垂直于带有液滴的载玻片放在顶部，使液滴变平，并施加压力，使琼脂糖液滴形成标签胶带的厚度。

然后，施加稳定的压力以分离两张载玻片。然后，将载玻片将琼脂面朝上放在台面上，并在使用前让其干燥一到两分钟。要将线虫添加到带有琼脂糖垫的制备载材料中，请在琼脂垫中加入一滴含有 1 摩尔叠氮化钠的 5 微升水，这将麻醉蠕虫并动员它们。

然后，使用蠕虫镐将每个处理载玻片至少10个线虫转移到液滴上，应在转移线虫之前和之后对液滴进行灭菌。接下来，使用镊子将其以一定角度放置并缓慢降低来添加盖玻片。

然后，将准备好的湿式安装片放在荧光显微镜上观察蠕虫，首先在10倍放大倍率和相差下，然后在40倍放大倍率下进行相差和荧光照明。

将一个准备好的湿式安装座放在显微镜载物台上，并使用显微镜载物台夹将其固定到位。然后，开始使用最低放大倍率物镜（通常为 10 倍）查看湿式安装座，并使用明场或相位对比来可视化和聚焦线虫。

一旦线虫位于视野中，使用显微镜上的精细对焦旋钮对焦它。然后，通过转动转盘将照明切换为荧光，并将光线引导到相机以捕捉数字图像。

接下来，使用成像软件调整照明，使神经元被明亮地照亮，但不会过饱和。在某些时候，以与细胞图像相同的放大倍率获得单独的尺子图像，以为其图形提供放大比例。