Lentiviral-Mediated Transduction of Human Neurons for Tau Protein Aggregation Analysis

doi:10.3791/31397

Encyclopedia of Experiments
Neuroscience

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Encyclopedia of Experiments Neuroscience

Lentiviral-Mediated Transduction of Human Neurons for Tau Protein Aggregation Analysis

用于 tau 蛋白聚集分析的慢病毒介导的人神经元转导

Protocol

396 Views

02:19 min

July 8, 2025

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Transcript

首先在基质涂层板中对成熟人类神经元进行贴壁培养。

添加编码与

黄色荧光蛋白（YFP）报告基因融合的突变人 tau 蛋白的慢病毒载体。

慢病毒附着在特定的神经元细胞表面受体上，实现病毒-宿主膜融合以及病毒 RNA 和酶的释放。

病毒 RNA 被逆转录为 DNA。

病毒整合酶将 DNA 转运到细胞核中，促进整合到宿主基因组中，并导致产生 YFP 标记的突变 tau 蛋白。

随着时间的推移，突变的 tau 在转导的细胞中形成细胞质聚集体。

用新鲜培养基洗涤细胞以去除未内化的病毒颗粒。

继续孵育，定期更换培养基，以维持神经元活力并促进蛋白质聚集。

在

显微镜下观察神经元。

成功转导的神经元表现出荧光 YFP 标记的突变 tau 蛋白的细胞质聚集体。

要用慢病毒转导神经元，请使用每个细胞 340,000 个可转导单位的滴度计数。将细胞培养基中的可转导单元稀释至必要的浓度，并将它们添加到细胞中。

加入慢病毒两天后，用不含bFGF的新鲜培养基洗涤细胞一次。

在

不含bFGF的培养基中继续在37摄氏度下用5%二氧化碳培养细胞。转导后将细胞维持约八周，确保每隔一天更换一次细胞培养基。使用光学显微镜常规观察细胞并确保活力。