慢病毒介导的人类神经元转导用于 Tau 蛋白聚集分析

从基质包被培养板中贴壁生长的成熟人类神经元培养物开始。

加入编码突变人源tau蛋白与黄色荧光蛋白（YFP）报告分子融合体的慢病毒载体。

慢病毒附着于特定的神经元细胞表面受体，从而介导病毒与宿主细胞膜的融合，并释放病毒RNA及酶类。

病毒RNA被逆转录成DNA。

病毒整合酶将DNA转运至细胞核内，促进其整合到宿主基因组中，从而表达YFP标记的突变型tau蛋白。

随着时间推移，突变型tau蛋白在转导细胞中形成胞质内聚集体。

用新鲜培养基洗涤细胞，以去除未内化的病毒颗粒。

继续孵育，并定期更换培养基，以维持神经元的活性并促进蛋白质聚集。

在显微镜下观察神经元。

成功转导的神经元表现出细胞质内聚集的荧光YFP标记的突变tau蛋白。

为了用慢病毒转导神经元，每细胞使用 340,000 个可转导单位的滴度。将可转导单位用细胞培养基稀释至所需浓度，并加入细胞中。

加入慢病毒两天后，用不含 bFGF 的新鲜培养基洗涤细胞一次。

在不含bFGF的培养基中，于37摄氏度、5%二氧化碳条件下继续培养细胞。转导后维持细胞培养约八周，每隔一天更换一次细胞培养基。使用倒置显微镜常规观察细胞，确保细胞存活状态良好。