在成年果蝇中诱导穿透性创伤性脑损伤

以新出现的转基因成年果蝇为例。

苍蝇大脑中的蘑菇体含有表达绿色荧光蛋白的神经元。

蘑菇体是包含对学习和记忆至关重要的复杂神经元网络的结构。

二氧化碳垫上麻醉苍蝇。

在配备所需滤光片的体视显微镜下，观察表达绿色荧光的蘑菇体。

取一个经过消毒的 Minutien 别针，将其穿过头部胶囊推入蘑菇体。

这会对蘑菇体神经元造成损害并破坏神经元网络，造成穿透性创伤性脑损伤。

接下来，轻轻地从苍蝇上取下别针。

受伤的苍蝇放入装有食物的小瓶中，让它们恢复以进行进一步研究。

二氧化碳垫上麻醉苍蝇后，在羽化后六小时内对新封闭的 F1 年轻雄性苍蝇进行分类，并将它们放入装有食物的干净小瓶中，每瓶苍蝇数量不超过 40 只。接下来，将大约 100 个针放入装有 70% 乙醇的 1.5 毫升微量离心管中 5 分钟，对 minutien 针进行消毒。然后，喷洒 70% 乙醇并用干净、无绒的纸巾擦干，对画笔中的二氧化碳垫进行消毒。

工具清洁干燥后，将 40 个或更少的分类 F1 公头转移到干净的垫上，并将它们分成两组。一组将作为未受伤的苍蝇作为对照，第二组将遭受穿透性创伤性脑损伤。接下来，使用镊子从微量离心管中拉出四到五个新的微针，并将它们放置在二氧化碳垫的边缘附近。然后，在解剖范围内，选择一个带有尖头的直分钟针。重复使用锋利的销钉，并将损坏或钝的销钉放入含有 70% 乙醇的单独管中，以便安全处置。

接下来，对于具有标准交叉基因型的果蝇，打开体视显微镜 LED 灯，该灯配备了适当的绿色荧光蛋白激发和发射滤光片，该灯允许在 440 至 460 纳米处激发，并允许在 500 至 560 纳米处进行可视化。然后，从实验组中选择一只苍蝇，并放置苍蝇，使实验者可以仰视头囊，苍蝇的头部向右。使用镊子，一只手拿起并握住选定的分钟别针，另一只手拿住画笔。然后，将刷子放在背胸内侧，轻轻向下推以稳定苍蝇。

小针的尖端对准蘑菇体，头部右侧的细胞体，并穿透头囊。如果使用地标，则瞄准单眼和眼睛背缘之间的背头角质层。完成损伤后，用画笔将头部轻轻推离小针。如果使用大脑进行 RNA 测序或 qRT-PCR，则在头部左侧造成第二次损伤。一旦所有实验苍蝇都受伤，将对照苍蝇和受伤苍蝇放入单独的贴有标签的装有食物的小瓶中。