Longitudinal Two-Photon Imaging of Fluorescently Labeled Neurons in a Live Mouse Hippocampus

doi:10.3791/31533

Encyclopedia of Experiments
Neuroscience

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Encyclopedia of Experiments Neuroscience

Longitudinal Two-Photon Imaging of Fluorescently Labeled Neurons in a Live Mouse Hippocampus

活体小鼠海马体中荧光标记神经元的纵向双光子成像

Protocol

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02:36 min

July 8, 2025

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Transcript

取一只在稀疏锥体神经元中表达荧光蛋白的麻醉转基因小鼠。

在背侧海马体上植入小鼠成像插管。

将

鼠标放置在加热垫上的双光子显微镜下，将插管的头板固定到支架上以固定其头部。

涂抹药膏以防止角膜干燥。

用去离子水清洁插管，并在低放大倍率物镜下检查，以检查是否有碎屑、损坏或荧光问题。

将

成像插管与显微镜的光轴对齐，以实现精确成像。

然后，切换到水浸高分辨率物镜。

用

去离子水填充插管，确保没有气泡，以免图像失真。

使用红外光进行双光子纵向成像，选择性地激发焦平面中的荧光团，从而实现深层组织成像。

植入的插管有助于重复进入背侧海马体，以跟踪树突随时间的变化。

将

鼠标放在显微镜下加热地毯上，并将头板固定到支架上。在动物的眼睛上涂抹眼药膏。然后使用注射器和细针清洁成像插管，将去离子水滴入插管，然后用真空泵取出。

使用低放大倍率、长工作距离物镜目视检查插管是否有残留水、污垢、完整性和荧光的存在。然后通过调整头架臂的角度将插管与光学轴对齐。

切换到具有 1.0 数值孔径和 4 毫米工作距离的 25 倍物镜。然后向插管中加入足够的去离子水以填充插管，并在插管顶部保持多余的水。最后，使用两个光子激发并对荧光信号进行成像。