活体小鼠海马中荧光标记神经元的纵向双光子成像

取一只表达荧光蛋白的转基因小鼠，其稀疏的锥体神经元处于麻醉状态。

在小鼠的背侧海马体上方植入成像套管。

将小鼠置于双光子显微镜下的加热垫上，固定套管头板至固定架，以固定其头部。

涂抹眼膏以防止角膜干燥。

用去离子水清洗导管，并在低倍物镜下检查是否有碎屑、损伤或荧光问题。

将成像套管与显微镜的光轴对齐，以实现精确成像。

然后，切换至水浸式高分辨率物镜。

用去离子水填充套管，确保无气泡，以避免图像失真。

使用红外光进行双光子纵向成像，选择性地激发焦平面内的荧光团，从而实现深层组织成像。

植入的导管可实现对背侧海马的重复性访问，以追踪树突随时间发生的变化。

将小鼠置于显微镜下的加热垫上，并将头固定板固定到支架上。在动物的眼睛上涂抹眼膏。然后使用注射器和细针向成像套管中滴加去离子水，再用真空泵抽吸清除，以清洁成像套管。

使用低倍率、长工作距离的物镜目视检查导管内是否有残留水分、污物、结构完整性以及荧光的存在。然后通过调节头部固定臂的角度，将导管与光轴对齐。

切换至数值孔径为1.0、工作距离为4毫米的25倍物镜。然后向导管中加入足够的去离子水，使其充满导管，并在导管顶部保持过量的水。最后，使用双光子激发并成像荧光信号。