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Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

幼虫，少年和成年斑马鱼的心脏解剖，斑马鱼

Full Text

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06:43 min

September 30, 2011

DOI: 10.3791/3165-v

Corinna Singleman¹, Nathalia G. Holtzman¹

¹Department of Biology,Queens College, City University of New York

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Summary

一个明确的，标准化的方法是在多个发育阶段的斑马鱼的心脏解剖和隔离。注释和定量分析技术进行了讨论。

Transcript

该程序的总体目标是去除斑马鱼的心脏。这是通过首先收集和固定斑马鱼来实现的。接下来，打开体腔以可视化心脏。

然后切除心脏并清除非心脏组织。最后，拍摄心脏。最终，可以通过显微镜检查、切片和摄影来观察心脏随时间变化的形态。

这种方法的视觉演示作为解剖的关键至关重要。Sta 很难学习，因为斑马鱼很小，组织颜色不明显，很难识别 从幼虫到成虫阶段生成斑马鱼。对于这些实验，与成年鱼进行单独的梨或群体交配。

清洁胚胎并将其存放在 28 摄氏度的培养箱中。受精后 5 天，将鱼以 10 到 15 条鱼的密度分入水箱中，然后放入养鱼设施中。在适当的年龄将鱼从鱼缸中取出，并将其放入 0.2% Trica 中麻醉。

将麻醉的鱼放入冰水中 15 分钟以实施安乐死。同时，在一个 XPBS 中加入 4% 对甲醛或 PFA。将收集的鱼在 4% PFA 中室温孵育 1 至 2 小时，然后在 4 摄氏度下在包裹 perfil 的培养皿中过夜。

这样可以保持鱼的平坦，并且在固定后更容易解剖。在含有 0.1% 吐温的 PBS 中冲洗两次，或者 PBT 鱼可以在 4 摄氏度的 PBT 中保存长达 10 天。将一条鱼放入培养皿中，半满新鲜 PBS，然后放在右侧。

使用数字毫米卡尺测量鱼从鼻子到尾巴根部的长度，不包括尾鳍。这是标准长度或 sl。为每条鱼分配一个数字字母组合，以允许跟踪单个鱼和所得解剖的心脏以供以后分析。

在电子表格中输入所有数据（包括所有测量值），并在解剖前根据这些标签进行组织。用分配的跟踪号标记 PCR 试管联排，并用 PVT 或其他适合进一步分析的溶液填充试管。在培养皿中将鱼腹侧部位向上定位，同时用镊子稳定身体，将头部保持在眼睛和鳃之间，对于标准长度短于 12 毫米的鱼。

使用锋利的镊子或针架中的微针。从身体中取出胸肌和鳍，露出心脏。解剖过程中镊子的不断运动会导致 PPT 中出现移动鱼的电流。

这对于较小的鱼来说尤其成问题。因此，需要使用微针去除胸肌和鳍并打开体腔。使用镊子从心房下方轻轻地将心脏从腔中舀出。

如果鱼含有荧光心脏标志物，请使用荧光镜进行解剖，并通过荧光验证心脏是否去除。将心脏从腔中取出后，使用镊子固定心脏，并使用微针从心脏外部去除多余的非心脏组织和心外膜内膜。适用于标准长度超过 12 毫米的鱼。

使用弹簧手柄的微型剪刀，做三个切口。首先，在鳃上做一个横向切口。其次，在前腹部再做一次横向切割。

第三，在腹侧做矢状切口，连接两个横向切口。使用锋利的镊子从体内取出胸肌和鳍，以打开体腔并露出心包的银色组织。去除这些心包组织，心脏就会变得可见。

使用微型剪刀剪断与位于心脏上方的球动脉相连的动脉。切开这条动脉后，将镊子的尖端放在心房下方，用镊子将心脏从腔中挖出。如果心脏有额外的组织，那很好，因为它可以稍后去除。

或者，在一些鱼中，可以通过轻轻地将球茎拉出来去除心脏，心脏的其余部分也会随之而来。如果使用替代技术，请小心心房的位置，因为它很容易损坏。如果心脏有多余的组织，这很好，之后可以清除。

将心脏从腔中取出后，使用两个镊子固定心脏并取出多余的组织，或用一对镊子固定心脏，用微针去除多余的非心脏组织。要拍摄斑马鱼心脏，请准备一个每升 23 克的营养琼脂培养皿，并用 PBS 覆盖凝固的琼脂。使用镊子在琼脂中挖一个孔，使心脏适合正确的方向。

握住球茎的尖端，从 PCR 管中取出心脏。用镊子牢牢地固定。将心放入琼脂培养皿中。

将

心脏定位在琼脂中进行拍摄。样品可以在每张图片后旋转到所有可能的方向。使用头顶、光线和较短的曝光时间拍摄心形。

根据需要

使用曝光调整光线品质以获得最佳照片。这里显示了一个经过充分解剖的干净心脏的例子。每颗心脏的整体形态都会有一些差异，但心脏应该是完整的，发育后包含一个完整的心室心房和球状动脉。

这项技术为斑马鱼心脏发育领域的研究人员探索斑马鱼发育各个阶段的心脏成熟铺平了道路。

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