生物荧光原位模型胰腺癌进展

该程序的总体目标是准备胰腺癌的原位小鼠模型，该模型使用体内生物发光成像来无创监测肿瘤发展。这是通过首先在 Matrigel 中悬浮荧光素酶标记的癌细胞来实现的。第二步是进行剖腹手术以打开腹腔并定位和保护胰腺。

接下来，将基质胶中的肿瘤细胞悬浮液注射到胰腺中。最后一步是更换胰腺并使用缝合线闭合腹腔。最终，生物发光成像用于监测肿瘤进展并跟踪对治疗干预的反应。

与基于体外的细胞测定或胰腺癌皮下模型相比，该模型的主要优势在于，它确实使我们能够研究胰腺肿瘤细胞与胰腺微环境之间的相互作用。该模型中疾病进展的动力学具有高度可重复性，并且发生时间短，使该模型可用于检查胰腺癌的新疗法，这真正证明了该模型至关重要。由于必须仔细进行肿瘤细胞的注射以防止泄漏 要开始此过程，请培养。

按照书面方案中的描述转导表达荧光素酶的胰腺癌细胞，直到它们达到 70% 汇合，然后用 0.05%tripsin EDTA 收获细胞，并使用血细胞计数器计数，确保活力大于 90%接下来，离心后以 200 倍重力轻轻离心 5 分钟，使细胞沉淀， 去除上清液，以每毫升 2000 万个细胞重悬胰腺癌细胞。在 matrigel 和冷冻 PBS 的 3 比 2 混合物中，将混合物放在冰上。然后使用 0.3 毫升 29 号胰岛素注射器。

将准备好的基质胶细胞悬液吸入注射器中。要开始此过程，请使用 2 至 3% 吸入的异氟醚麻醉小鼠。一到两分钟后，轻轻捏住鼠标的脚趾以检查麻醉深度，以检查踏板反射是否缺失。

接下来，在每只眼睛上涂抹足够的润滑剂，以防止手术过程中干燥。然后将鼠标背面放在 37 摄氏度的加热垫上，轻轻转动鼠标以抬高腹部左侧。一旦方向正确，为小鼠的腹部准备手术。

使用无菌手术器械，在距中线左侧约 2 毫米的皮肤上切开 1.5 厘米。然后在下面的腹部肌肉上做一个 1.5 厘米的切口。接下来，使用无菌镊子找到脾脏，然后轻轻将其取出以进入腹腔。

沿着无菌棉签固定脾脏，以暴露下面的胰腺。然后找到靠近脾复苏器的胰腺尾部。悬浮基质胶细胞悬液，注射后向胰腺尾部注射 20 微升。

将注射器固定 30 到 60 秒，直到基质胶有时间凝固，这个重要步骤可最大限度地减少细胞渗漏。取出针头后，检查注射部位，确保没有发生渗漏。然后将脾脏和胰腺放回腹腔。

用可吸收的编织四人缝合线和圆针，使用连续针迹闭合小鼠的腹部肌肉组织。接下来，用不可吸收的单丝闭合外部皮肤。用切割针使用连续针合六人线并涂抹 Betadine。

然后将小鼠从吸入麻醉剂中取出，皮下注射每公斤丁丙诺啡 0.05 至 0.1 毫克。作为术后镇痛药，让鼠标在笼子里恢复，放在 37 摄氏度的加热垫上，可以自由获取食物和水。在手术后的最初几天继续密切监测小鼠。

如果小鼠表现出疼痛迹象，例如驼背或行动不便，可以在 36 小时内每 12 小时皮下注射丁丙诺啡。手术部位在 7 到 10 天内愈合后，麻醉小鼠并移除外部缝合线。开始胰腺癌细胞的生物发光追踪。

再次使用 2 至 3% 吸入的 isof 氟麻醉小鼠，并在眼睛上涂抹润滑剂以防止干燥死亡。麻醉后，通过尾静脉注射每公斤 150 毫克荧光素，并等待 1 到 2 分钟让荧光素进入细胞。将鼠标放在生物发光成像系统中的右侧，使肿瘤指向相机。

这里我们使用的是 Illumina 双成像系统。然后使用成像软件捕获白光和生物发光图像，如之前其他 JOV 文章中所述。成像完成后，将鼠标从吸入的麻醉剂中取出，让它在家笼中恢复。

在整个肿瘤生长期间重复这些步骤，以研究肿瘤生长。动力学。使用荧光素酶标记的细胞系提供了一种测量肿瘤生长的独特方法。非侵入性。这里显示的是注射后 10 天肿瘤相对较小的小鼠，注射后 31 天肿瘤扩大，以及切除肿瘤后 5 天。

这张图像中看到的生物发光显示胰腺肿瘤在切除 5 天后复发，并转移到附近的肝脏。此处显示的图表显示了基质胶细胞注射方法的相似生长速率。本视频中描述的比较了另一种胰腺肿瘤块移植落地的方法。

pan one 和 capin one 都可以看到类似的生长动力学。处死后的细胞系，已进行 H 和 d 染色，以显示胰腺癌细胞对周围胰腺组织的侵袭性，此处显示为黄色星号，以及其他器官（包括此处显示的肝脏）中的转移。掌握后，这些方法可以在大约 10 分钟内完成。

此外，转移性和复发性疾病进展的 bio cent 可视化使该模型具有临床相关性，因为目前大多数癌症治疗都是姑息性的。