导管内注射局部给药的小鼠乳腺

该程序的总体目标是无创地将水性试剂输送到小鼠乳腺。介绍的。这是通过首先麻醉鼠标并去除周围的毛发来实现的。第二步是使用微型镊子去除覆盖在尖端的死皮。

接下来，使用 33 号针头将水溶液注入奶嘴。最后一步是通过观察注射部位是否有潜在的肿胀来确保注射成功，这将表明注射乳房脂肪垫而不是注射到乳腺中。最终，可以通过埃文思蓝注射后延性树的可视化来确定该程序的成功。

这种方法可以帮助回答乳腺癌领域的关键问题，例如特定基因在记忆肿瘤发生各个阶段的贡献。首先，在注射前为每只待注射的小鼠准备 160 微升 0.2% 埃文思蓝染料。称量每只鼠标并记录其体重。

然后使用 isof 氟室一次麻醉一只小鼠并涂抹眼睛润滑剂。镇静后，放置一个 isof fluorine 鼻子并在手术前以每公斤 5 至 10 毫克的剂量皮下注射美洛昔康作为手术过程中的镇痛剂，持续监测小鼠呼吸频率的变化，并相应地调整 isof fluorine 的水平，特别是如果小鼠的呼吸频率表明需要降低麻醉水平。接下来，使用非处方脱毛霜准备注射区域。

等待 5 分钟，然后用棉签涂抹器轻轻去除松散的头发。以圆周运动方式，使用蘸有温水的湿纸巾去除任何残留的乳霜。然后轻轻地贴住四肢，将鼠标固定在立体镜下，并用酒精棉签清洁注射部位。

首先，在立体镜下找到要注射的。然后使用精细的显微解剖镊子去除覆盖开口的任何死皮。无需切割进行注射。

接下来，将 11 微升注射液装入一个 50 微升注射器中，注射器上装有 33 号金属中心针。注射后经常会泄漏 1 微升的注射液，导致最终目标是成功注射 10 微升溶液。用细镊子轻轻握住奶嘴，然后轻轻抬起以定位注射。

然后将 11 微升注射到第一对和最后一对乳腺的每个腺体中，因为它们需要比中间一对更低的体积才能完全充满腺体的延展树。接下来，将 21 微升注射到第二对至第四对乳腺的每个腺体中。注射速度应保持在每分钟 40 μL 左右，以尽量减少导管管腔内快速移动的液体造成的任何潜在损害。

注射后。观察注射部位。区域或周围组织不应有外伤迹象。

周围区域肿胀。可能表明乳腺脂肪垫注射，而不是导管注射成功。然后将动物从鼻锥中取出，并将其移至单独的笼子中进行恢复。

将笼子放在加热灯下，以防止体温过低并帮助恢复。单独饲养动物并密切监测它们，直到它们恢复意识和活动能力。研究完成后，在隔离室中用 CO2 压缩气体后通过颈椎脱位对小鼠实施安乐死。

然后切除乳腺并继续进行适当的样品处理以进行感兴趣的分析。这里显示的是小鼠在通过注射 Evan's Blue 染料之前和之后的乳腺。区域没有肿胀或组织损伤，这是由于将染料注射到导管周围的脂肪垫中引起的。

右图中看到的弥漫性蓝色染料是正确注射的良好指标。这可以通过观察整个腺体或切除腺体后的横截面来验证。在此处显示的整个镶嵌分析中，埃文思蓝注射腺体显示整个腺体充满了染料，而不会损坏天然鸭子结构。

Carmen Dye 证实了这一点，它也突出了延展性结构。也可以利用这种方法将治疗性分子（如 irna）递送到导管细胞。在此处显示的图像中，注射了靶向镰状填充素的荧光标记 irna，这是一个非必需基因，然后在 48 小时后对组织进行成像以显示分子的定位。

遵循此过程。可以进行其他方法，如 SRNA 敲低，以回答与特定基因在记忆发育或肿瘤发生中的作用有关的其他问题。