3.14: 黑腹果蝇卵和幼虫采集及准备

黑腹果蝇的胚胎和幼虫易于作，它们的发育受其他生物体（包括哺乳动物）中存在的机制指导。学习收获和准备胚胎和幼虫是从行为生物学到发育生物学的许多实验过程的初步步骤。 该视频将介绍收集和收获果蝇胚胎和幼虫的标准方法，以及使用这种多功能模式生物的基本程序。

对果蝇胚胎的研究为基因调节发育的方式提供了深刻的见解，从在卵母细胞中表达为梯度的 mRNA 到形成前后分段身体计划的基因。其中一些基因，如同源框基因，在这种昆虫和哺乳动物之间是高度保守的。

果蝇胚胎的丰盛特性使它们能够承受恶劣的环境和化学物质，这使得它们非常实用。

受精后，一只雌性苍蝇每天可以产下多达 100 个胚胎，这些胚胎将在 12-15 小时后孵化成幼虫。

为了纵果蝇胚胎，必须首先收集它们。

胚胎被收集在通常称为"产卵杯"的产卵室中。

要组装产蛋杯，首先要戳孔或切出容器的一部分，然后用多孔材料覆盖它以允许通风。 然后获得苹果汁或葡萄汁琼脂板，用酵母糊划线，并在板子的中心划伤。 酵母糊的存在会诱导产卵。

快速将苍蝇加入产蛋室，倒置腔室，使板位于底部，然后让它孵化。 在所需的孵化时间后，将蛋室倒置并在工作台上敲打几次。 苍蝇落到底部并短暂地迷失方向。快速将旧的琼脂板更换为铺有酵母糊的新鲜板。为了获得最佳年龄的胚胎，每 1-3 小时更换一次板。

板将有数百个胚胎，尤其是在划痕和酵母附近。

每种性别 20 只苍蝇每小时应产生 100-200 个胚胎。现在可以收获胚胎了。

胚胎收获所需的工具是过滤器或筛子，其大小和复杂性可能差异很大，画笔和蒸馏水。

首先，将板浸入蒸馏水中，用画笔轻轻刷洗表面，以松开胚胎。接下来，将混合物倒入筛子中过滤出液体。用水冲洗胚胎。

冲洗后通常进行去绒毛处理 ？去除胚胎的坚硬外膜或绒毛膜。

可以通过从绒毛膜鞘中解剖胚胎来手动完成去绒毛膜。或者，可以将胚胎放入 50% 的漂白剂中。 绒毛膜需要 2-10 分钟才能溶解，如背附件消失所示。用蒸馏水彻底冲洗，以确保裸露的胚胎没有被漂白剂损坏。去绒毛膜是显微注射和活细胞成像等技术的先决条件。

现在您已经了解了胚胎生物学、收集和收获，让我们继续进入果蝇生命周期的下一个阶段：幼虫。

果蝇幼虫有三个"龄期"或蜕皮阶段。 第一龄持续一天，第二龄持续一天，第三龄持续两天。 建立杂交后 1-3 天，在小瓶的食物中发现第一龄和第二龄幼虫。 在第 4 天，第三龄幼虫向上迁移，或"徘徊"在容器的侧面，它们最终会在那里形成称为蛹的茧。

幼虫经常被用于实验，因为它们的想象盘。 假想盘是部分发育的器官，已知它们会成为成年果蝇的完整部分。例如，假想的眼盘会变成成年的眼睛，触角盘会变成触角，假想的翼盘会变成翅膀。对假想盘的研究导致了果蝇的重要发现，例如同源框基因在模式形成中的作用。

幼虫收集比胚胎收集更简单，因为它不需要将果蝇转移到特殊的住房中。

可以用镊子或抹刀去除单个幼虫。当收集大量早期幼虫时，您可以采用另一种使用蔗糖溶液的收集方法，蔗糖溶液比幼虫更致密，并导致它们漂浮。

将蔗糖溶液添加到小瓶中，使幼虫浮到顶部。将小瓶放在旋转器上，将食物移出。然后用刷子或移液管去除幼虫并收获用于实验。

现在我们已经介绍了胚胎和幼虫的收集和收获技术，现在让我们看看如何将它们应用于实验。

由于它们是可移动的，果蝇幼虫可用于行为实验。

在这里，您可以看到一个"爬行测定"，用于评估特定条件下果蝇的运动行为。爬行测定法测量幼虫移动的距离，以观察药物对运动功能的影响。将收集的幼虫浸入预计会干扰运动的下药蔗糖溶液中。

显微注射是一种通过以环状 DNA 质粒形式插入定制遗传物质来制造转基因果蝇（称为转基因突变体）的程序。

这些胚胎通过在双面胶带上物理滚动来分离，这样化学物质就不会损坏它们。然后可以向胚胎注射编码蛋白质（如微管蛋白）的质粒，这些质粒与荧光报告蛋白（如 GFP）融合。然后可以进行实验以可视化来自已建立的转基因苍蝇系的细胞过程，如有丝分裂。

胚胎可用于通过荧光原位杂交来可视化转录本的存在。

在该实验中，通过荧光显微镜观察整个胚胎是否存在所需的 mRNA 转录本。胚胎使用除焦离子的双相溶液固定，因此为胚胎染色做准备。裸露的胚胎在底层。免疫荧光染色后，使用荧光显微镜可以看到所需蛋白质的存在。

您刚刚观看了 JoVE 的胚胎和幼虫收获和准备视频。我们回顾了胚胎和幼虫的收集、收获和制备以及应用于早期生物体的一些重要应用。感谢观看！