视网膜神经节细胞逆行标记的成年斑马鱼与荧光染料

Adults.Debra Fish 具有独特的能力，可以在受伤后再生神经系统，如毛细胞、嗅瓣、T 甩、脊髓和视神经。作为 CNS 的一部分，视神经损伤可诱导 RGC 存活和变性。然而，HG 染色和抗体 IHC 不能特异性标记 rrg 疾病，转基因系标记所有 R GCs 尚未构建。

为了研究成年斑马鱼视神经损伤后 R GCs 数的变化，我们通过逆行标记 RGC 成功地标记了所有 RGC。嗨，我是我是，我们是中国雷克萨斯销售技术大学神经发育与修复学院实验室的成员。今天我们将向您展示如何逆行标记 ABRA 鱼中的 RG CS 并获取整个山视网膜中的 RG CS 编号。

所以让我们开始吧。首先，我们需要建立一个灌注系统来细读麻醉和淡水。您可以在此影片的附件 PDF 文档中找到有关运算符的更多详细信息。

将盒子放在上面，确保液体能从盒子顺利流到鱼身上。在手术过程中对所有作员进行消毒。准备几个速球并将它们放入洞穴中。

用 75% 乙醇和无水乙醇滴注。准备一只神经眼，用玻璃针来深化它，此外还需要 geo Form 酸蚀、光固化绑定钳、珠宝镊子、针灸、钝镊子、scle 直肠、剪刀、阴道拭子。突出的蓝色 LED 玻璃针，末端带有神经眼、打火机和 75% 乙醇。

用 0.03%MS 三重二茴香鱼。然后将其放入海绵的缝隙中。只需将灌注速度增加到每秒约 1 滴。

将针头放入鱼嘴中进行氧合。用一块鲤鱼盖住鱼，以保持鱼皮湿润。现在我们转向顶部视图了解更多详细信息。

首先，去除整个 sc 上的皮肤。用棉签擦拭表面。用突出的 shighlight 清洗 thecal。

然后用洗耳球擦干。用药剂腐蚀颅骨 10 秒，彻底擦去药剂。然后用突出物清洗该区域并晾干 覆盖区域.

接受正确的构造层，并带有光固化入口，以防止传入的腐蚀。在蓝光下照射 40 秒即可固化。再次将代理放在右侧 Tum 上以完全边缘。

在两分钟内，完全擦掉代理。然后用突出物清洗该区域并晾干。用 5 号镊子小心地打开头骨。

为了暴露正确的触觉，用 geo formm 吸收从伤口注入的脑脊髓液。将染料涂在整个右盖上。然后在 D 眼上覆盖一块 geo formm，将其连接到整个右外盖 Tally。

用 ster 盖住洞。从沙鱼中除垢。用光固化包扎物密封伤口，然后用蓝光固定。

关闭麻醉溶液。用淡水让鱼复活。通常我们会切断他们的东西，这样他们就不会快速摆动。

在我们的实验室，所有手术均由熟练的人员完成。每条鱼需要 10 到 12 分钟。半天可以标记大约 20 到 30 条鱼。

Retina 不包括在 Celia Zone 中。用静脉剪刀去除 Celia 区和角膜，制作眼罩。取下镜片，然后用 I-C-P-B-S 冲洗出水性液体。

冲洗掉椎间盘处的色素切割视神经。去除巩膜以获得视网膜。将视网膜固定在 2% 的 PFA 中是可选的。

如果分离后成像不迅速，请在封片前清洁血云和颜料碎片。运输 用弧形盖玻片制成的勺子运输视网膜。年龄用线条标记。

将视网膜放入 ic. 30% 甘油上显微镜。滑。保持 RGCL 向上。

去除甘油，然后将视网膜切成四个象限。滴 20 微升。我在视网膜上看到 75% 的甘油。

用 1.8 厘米的方形盖玻片盖住样品。用指甲油密封盖玻片和市场。通过该手术在荧光显微镜上观察样品。

我们成功地逆行标记 RTCs。调整斑马鱼并获取整个山视网膜中的 RTCs 编号。通过使用光固化边界，我们提高了斑马鱼的存活率，使这种方法更加有效。