吗啡诱发的痛觉过敏和镇痛耐受小鼠中利用热和机械伤害性的评估方式

以下实验的总体目标是观察小鼠阿片类药物诱导的痛觉过敏和镇痛耐受性的发展。这是通过测量幼稚小鼠在第 0 天施用吗啡后在一段时间内的热和机械伤害性反应作为第二步来实现的。在第 7 天施用吗啡之前每天测量伤害感受阈值。

再次测量吗啡的镇痛效果，以揭示镇痛耐受性的发展。获得的结果表明疼痛敏感性增加以及镇痛耐受性的发展。重复吗啡给药后。

虽然这种方法可以深入了解多只小鼠的疼痛超敏反应和镇痛耐受性的发展。在慢性阿片类药物治疗后，它也可以应用于其他阿片类药物或转基因小鼠。演示该程序的将是我实验室的一名研究生为了尽量减少压力诱导的镇痛，每天处理小鼠五分钟并习惯性地直到它们自由进入限制器。

习惯后，通过将恒温器设置为 48 摄氏度来开始尾部浸入测试。轻轻地将鼠标引入限制器。适当约束后，将其尾巴突出的三分之二端浸入水浴中，然后启动天文台表。

区分伤害感受和伤害感受反应是该程序的关键要素。适当的仲裁和实践对于成功至关重要。监控动物的运动并停止计时器。

一旦鼠标将尾巴从热水中抽出，请记录取款延迟。将鼠标放回笼子并测试下一只动物，直到系列结束，保持相同的顺序。再重复伤害感受反应测量两次。

每只小鼠的伤害性反应潜伏期（以秒为单位）被确定为三次连续测定的平均值。对于尾部压力测试，首先将鼠标轻轻引入束带，并将其尾巴放在肛门 JMeter 的锥尖下方。就位后，按下脚踏开关，对尾巴的近端部分施加均匀增加的压力。

在伤害性反应的第一个迹象时，撤回尖端。伤害性反应可能包括挣扎、吱吱作响或尾巴撤回。以克为单位记录引起伤害性反应的电流力。

32 次间隔在同一只小鼠尾巴的正中和远端部分重复此测量，将动物放回其家笼并重复这些步骤，直到所有小鼠都得到测试。首先，定义两组具有可比平均伤害感受值的动物。接下来，测量并记录每只动物的体重。

一旦盐水和吗啡基团建立，在生理盐水中制备吗啡溶液用于皮下给药。测量尾部浸入和尾部压力测试中的伤害性反应潜伏期，并将其记录为每组的时间 0.0。接下来，根据每只动物的组别，给它们注射吗啡或生理盐水。

30 分钟后，开始记录每只动物的伤害性反应。密切注意临界值，因为小鼠不太可能在这个早期时间点对有害刺激做出反应。在没有伤害性反应的情况下，使用 25 秒的截止时间来防止组织损伤，同时保持相同的测试顺序。

每 30 分钟重复一次伤害感受测量，直到注射后 3.5 小时用于慢性吗啡治疗。如前所述，通过测量动物对 TIT 和 TPT 的伤害感受反应来获得第一天的值。准备新鲜的吗啡溶液。

根据小组分配进行吗啡或生理盐水注射，并让动物休息至第二天。第二天，在进行第二轮注射之前，测量 TIT 和 TPT 的伤害性反应。每天重复这些步骤，持续 6 天。

第 7 天，评估吗啡诱导的镇痛效果。根据前面在尾部浸入试验中证明的时间进程范式，吗啡在 30 分钟后达到最大镇痛效果。然而，在尾压测试中，与盐水注射对照相比，60 分钟后达到最大效果。

这些结果表明，在 7 天的治疗期间每天注射吗啡诱导热和机械基础伤害感受值的显着和进行性降低。长期治疗后，吗啡处理小鼠的基础伤害感受值显著低于注射生理盐水的对照小鼠。急性吗啡后，慢性吗啡治疗组的伤害感受反应显着增加，但仅略高于生理盐水注射对照的基础伤害感受值。

TIT 和 TPT 中测量 30 分钟以及在 TIT 中测量 60 分钟的小鼠，这里绘制生理盐水或吗啡注射后 30 分钟测量的伤害感受阈值，用于第 0 天和第 7 天之后的发育。这项技术为疼痛研究领域的研究人员铺平了道路，以探索遗传干预的药理学对慢性吗啡给药诱导的疼痛超敏反应和镇痛耐受性的发展的影响。