男性附属性腺产品对腹足软体动物下蛋的影响

该协议的总体目标是表征蛋白对同时雌雄同体物种的产卵行为的影响。这是通过首先从标准化实验室培养物中分离个体，然后解剖靶器官来实现的。其次，收集精子并制作治疗液。

在此之后，蜗牛进行人工授精。然后他们被放在一篇个人简介文章中。在标准条件下，收集、扫描蛋团并放入单独的 BS 中孵化。

几周后，对幼龟进行计数和扫描，之后可以使用免费软件分析所有图片。该协议可以帮助回答有关通过蛋白介导的性选择过程的问题。因为我们在这里研究的是同时存在的雌雄同体，所以我们还可以解决这些过程是否以与不同性别物种相似或不同的方式工作。

对于这个协议，我们使用了 les 中的大 IL，我们在阿姆斯特丹的 VU 大学维护了它。我们用这个物种来研究有关性选择和繁殖的问题。在雌雄同体中，由于它的体型相对较大，它在实验上很容易获得。

此外，由于它在许多不同的生物学科中被用作模式物种，因此我们对这些动物的基本生物学了解很多。我叫 Yumi。我是生态科学系的博士。

在完整的大学中，我将演示以下协议。让我们开始吧。为了进行可靠的 biosa，最常使用 A 实验室培养来排除潜在的变量。

低铜水保持在 20 摄氏度，明暗周期为 12 x 12 小时。在 VU 大学，实验室培养物保存在具有连续水交换的育种设施水箱中。在标准条件下，成年蜗牛在时喂食生菜，并根据它们的年龄等级进行分离。

蜗牛一旦从繁殖设施中移出，将被视为正在使用，不能退回繁殖池。在开始手术之前，您需要一台立体显微镜、一个带针的解剖板、小手术剪刀、镊子、一个装满氯化镁溶液的注射器和一些纸巾来对蜗牛实施安乐死，用注射针以 45 度角刺入脚部，并轻轻地连续施加压力，直到蜗牛放松并保持伸展。取下注射针头，确保蜗牛被安乐死。

接下来，拿起镊子小心地去壳。沿着弯曲的一半轻轻地从壳上刮下 ular 肌肉。然后沿着壳的缠绕方向轻轻地将蜗牛从壳中扭出。

现在蜗牛已经从壳中取出，壳可以丢弃了。随后，将蜗牛放在解剖板上，并在脚的后端放置一个针。然后将针穿过头部。

在蜗牛上施加一些张力，然后将销钉放入盘子中。现在蜗牛已经准备好进行解剖了。打开立体显微镜的灯并调整显微镜。

在做第一个切口之前，定位女性 por 很重要。这将在后面作为一个参考点。在外套膜的边缘下做一个第一个切口，然后切向 Female por。

将 bonno 毛孔转向头部。确保只切开皮肤，不要碰到任何器官，并切成一条直线。在这项研究中，我们将分别解剖出前列腺和精囊的和精子。

请注意，对于完整的精子和储存，应将蜗牛隔离一周，以喂养。解剖与前面解释的相同。精囊位于动物的后部。

接下来，将前列腺悬浮在盐水中并放在冰上。稍后。这些将与处理溶液混合。

在阴道内注射之前，将收集的精子以相关剂量添加到或单个蛋白质中。对于这种人工授精技术，您需要一个装有测试溶液的 1 毫升注射器 将注射针头安装在注射器上，确保注射器中没有气泡卡在注射中，小心使用硅胶管。将硅胶管滑过注射针。

确保管子已刺穿并去除管子中的空气。注射前，必须对蜗牛进行镇静。这将遵循与第二章相同的协议。

蜗牛将接受 2 到 3 毫升 50 微磨牙氯化镁的剂量。当蜗牛适当镇静和放松后，将其放在模具中以保持其稳定位置。接下来，用一对细镊子抓住硅胶管的末端，轻轻地将其推入女性孔中。

然后轻轻地对注射器施加压力，并小心地注入规定体积的测试溶液。等待半分钟，让管中的压力扩散到女性器官中。在此之后，小心地取出管子并将蜗牛放入其自己的特定容器中。

毕竟，蜗牛是人工授精的。它们可以被运送到他们的实验罐中，然后开始 bios 生物测定。几个小时后，蜗牛将从镇静中恢复。生物测定。

对于性选择，实验通常需要两周时间才能开始 biosa。将所有个体放入自己的容器中并贴上标签很重要。接下来，测量每只蜗牛的壳的长度。

这是他们体型的一个很好的指标，这会对性行为产生影响。在此之后，将蜗牛放入实验水箱中。该水槽具有与饲养设施相同的标准条件。

正如第一章所讨论的，将容器放置在正确的方向非常重要，这样开口就会跟随水箱中的水流。在生物测定期间，必须定期喂食蜗牛。用金属打孔机切割标准量的生菜盘。

足够的剂量是每隔一天两片。对于模式物种 lumia stauss，应每隔一天检查一次蜗牛的卵团。将收集这些卵块进行测量。

为了扫描种蛋，您需要一台包含扫描仪驱动程序的笔记本电脑、一台平板扫描仪、一个标准毫米秤、一个用于转移板的卵团勺和放置在蛋团顶部的玻璃板。首先，拿勺子从容器壁上刮下蛋块。不透明的卵块刚刚产下，不能使用。

在此测量事件中，将鸡蛋团放在转移板上并重复这些步骤，直到板装满。在此之后，按照与转移板相同的顺序将鸡蛋块放在玻璃砖上。鸡蛋块会粘在玻璃砖上，将其倒置，然后小心地将其放在秤下方的平板扫描仪上。

然后对盘子施加压力以压扁蛋块。即使现在，这也会添加所有鸡蛋，以便它们被扫描得同样好。扫描前，建议调整设置 为获得最佳效果。

对于扫描，请务必将分辨率调整到最大以进行预览扫描 随后裁剪工作区域，最后，在进行最终扫描之前调整亮度和对比度。扫描后，蛋块将被放入自己标记的小瓶中，使其成熟和孵化。这些小瓶每隔一天更新一次水，以保持氧气处于适当的水平。

随着更多的蜗牛孵化，应该使用不同的技术来刷新水。最好的顺序是先倒入或溢出，然后用移液器吸出水 打开图像 JA 电子表格程序。要首先从图像 J 中记录数据和照片，请使用缩放工具导航到毫米刻度。

放大并调整窗口，使 1 毫米填满屏幕。使用线条工具在两条指标线之间绘制一条线。接下来，导航到 analyze，然后设置 scale。

在弹出菜单中，您将看到 Measured length adjust known distance （测量长度） 将已知距离调整为 1，单位为毫米。选中 global 框并关闭窗口。现在比例已经设置好了，我们可以缩放到第一批鸡蛋团 最多 800%使用椭圆工具画出鸡蛋的周长。

按 D 绘制 Circumference。这将有助于防止重复测量同一个鸡蛋。按 M 测量周长。

收集到足够的数据后，将弹出一个窗口。数据窗口可以另存为 Excel 文件。数据也可以直接复制到工作表中。

如果首选测量值未显示在弹出窗口中，则可以进行调整和分析。设置测量值，计算每个鸡蛋质量的单个鸡蛋也可以在细胞计数仪插件的帮助下完成。导航到 plugins。

然后分析并选择 cell counter。将弹出单元格计数器窗口。选中 Keep original 框，然后按 initialize。

此时将显示一个新的计数器窗口。从工具栏中选择 cross here 工具。然后在单元格计数器菜单中选择计数器类型。

通过单击单元格计数器窗口，将对鸡蛋进行计数。总计数可以在 cell counter 菜单中的计数器类型旁边找到。可以使用细胞计数仪对多个卵块进行计数。

如果需要，可以添加和删除计数器类型，此数字必须手动复制到电子表格或按结果，然后会弹出一个窗口。显示所有结果。通过这种方法，我们展示了如何收集蛋白，以及如何以有意义的方式测试这些蛋白质。

我们已经使用完整的前列腺提取物证明了这一点，但当然，单个蛋白也可以用同样的方式测试。此外，还可以查看其他过程和产蛋。我们的实验结果表明，有一种叫做 avios 他汀类药物的蛋白可以介导卵道的减少。

此外，我们发现转移会增加大小或柱。他汀类药物是同时雌雄同体中第一个完全表征的蛋白。虽然的影响经常在性别不同的物种中被报道，但我们的结果强调在雌雄同体中同样重要。