小鼠模型的非侵入性成像检测和监测卵巢癌复发

该程序的总体目标是建立一种腹膜内卵巢癌异种移植模型，该模型模拟在卵巢癌患者中观察到的临床特征。这是通过在裸鼠体内宫内注射 mCherry 荧光标记的卵巢癌干细胞来实现的。接下来，通过测量荧光作为肿瘤负荷的替代物来确定肿瘤肿瘤进展的建立和对治疗的反应。

这允许实时监测肿瘤进展或对治疗的反应，而无需牺牲小鼠。我们在这里展示的模型。B 概括了在卵巢癌患者中观察到的临床情况，因此它使我们能够不仅研究疾病的生物学，还可以确定新的疗法，尤其是针对复发性卵巢癌。

该模型使我们能够监测肿瘤的进展，以实时确定它们是否对化疗有反应，还可以确定如果停止化疗，疾病是否会复发。要开始此程序，请麻醉一只 7 到 8 周龄的胸腺裸鼠，含 2% 的氟。然后通过捏住它的脚垫来验证它是否完全麻醉。

接下来，将动物右侧放在上面，无菌纱布垫，头部远离实验者。在双眼涂抹软膏以防止之后麻醉时干燥。将动物的头部快速插入连接到异氟醚蒸发器的鼻锥系统中。

使用酒精棉片对腹部右侧进行消毒，然后用碘酒消毒。然后使用无菌手术剪刀和镊子将无菌手术单放在上面。在鼠标的左下象限做一个 1 到 2 厘米的皮肤切口。

之后，抬起肌肉并做一个切口以到达腹膜。随后，解剖斜肌以露出腹腔。然后使用无菌止血钳定位左子宫角，包括子宫角的前侧和后侧。

将前夹放在输卵管正下方，将后夹放在子宫颈正上方。此时，有第二个实验者。通过将含有细胞的针头以垂直于牛角的 45 度角注射细胞悬液。

然后缓慢地将 50 μL 细胞悬液注射到子宫角的腔中。接下来，松开前夹，然后松开后夹。之后，将子宫角放回腹腔。

使用合成可吸收缝合线闭合腹膜。然后使用纸巾粘合剂闭合皮肤。完成后，将鼠标从鼻锥中取出，然后将其放回笼子中。

在无人看管之前，请确保动物是清醒的并且是活跃的。在手术后的前 48 小时内在饮用水中提供布洛芬。现在打开分子成像软件，然后打开 Mars Capture 软件。

该模块提供对火星捕获设置的协调控制，同时利用成像系统捕获和分析功能。接下来，输入预先确定的捕获值。随后将参数保存为单独的会话文件。

然后通过选择创建编辑协议按钮创建旋转序列方案从系统界面采集窗口中，选择之前保存的荧光会话文件并保存为步骤 1。接下来，选择相应的 x-ray 会话文件并另存为步骤 2。选择步骤 1。

使用图像捕捉前弹出菜单中的"设置旋转序列"来设置所需的起始角度范围和增量。为了确保特征的无缝可视化，具体值包括负 180 度的起始角度、375 度的范围和 15 度的增量。保存协议并单击 done 按钮初始化 Mars。

然后通过选择获取菜单中的预览按钮来启动旋转器选项卡，使用为 M cherry 成像指定的荧光捕获设置。在预览期间保持门打开以加快定位速度，这也允许在对齐过程中目视检查鼠标的位置。接下来，选择 load mouse 选项并继续浏览一系列定位菜单。

确保可折叠鼻锥的管端位于鼻锥凹槽中。然后将麻醉的小鼠置于俯卧方向，头部位于鼻锥中。从零度位置开始校准，动物腹侧朝下。

使用旋转系统上的两个旋钮来定位动物，使其在预览窗口中居中显示。按照提示对负 180、负 90 加 90 和加 180 度位置重复该过程，然后单击 完成。以下是从采集的图像生成的电影示例。

该图显示了腹膜内肿瘤负荷与荧光 X 射线叠加图像之间的相关性。注射 F 后约 32 天，进行 2 个 M 樱桃卵巢癌细胞 2D 成像，并处死小鼠以将获得的图像与实际肿瘤负荷相关联。这里显示的是允许多角度成像和检测对照、紫杉醇治疗和复发小鼠的肿瘤的旋转数据集。

每个面板显示一个鼠标的图像，因为它使用 Mars 系统旋转。请注意，即使在具有显着肿瘤负荷的对照小鼠中，肿瘤大小也可能被低估，具体取决于拍摄图像的角度。观看此视频后，您应该能够使用宫内途径建立腹膜内卵巢癌异种移植模型，并能够使用多模态旋转系统进行活体动物成像。