注射原位乳腺癌细胞到小鼠乳腺脂肪垫来研究肿瘤的生长。

癌症是受肿瘤周围的组织，以及本地亲和抗炎介质影响的复杂疾病。因此，正交注入模式的，而不是皮下模型可能是有用的，研究癌症进展的方式，更好地模拟人类的病理。

该程序的总体目标是研究小鼠记忆脂肪垫中肿瘤细胞植入后的乳腺细胞进展。这是通过将乳腺癌细胞注射到成年小鼠的记忆脂肪垫中，然后在预定时间水平用卡尺测量肿瘤体积来实现的。在实验结束时，确定肿瘤质量和体积，并收集动物的血液和肺用于进一步分析。

最终，宏观和微观转移可以分别通过视觉和免疫组织化学分析进行量化。与皮下肿瘤细胞注射等现有方法相比，该技术的主要优点是乳腺脂肪垫注射部位模拟乳腺肿瘤形成的原始部位，从而产生更可靠的结果。这种方法可以帮助回答乳腺癌领域的关键问题，例如哪些肿瘤、抑制因子、癌基因或基质区室成分参与癌症进展。

手术前一天，将 N-O-D-S-C-I-D γ 小鼠从第四个剃到中线并称重，以验证所有动物的体重是否大致相当。第二天，用 PBS 洗涤人乳腺癌细胞培养物一次，然后在大多数细胞分离时尝试茴干细胞。用 10 毫升含有 DMEM 培养基的血清淬灭反应，然后在室温下以 1， 200 RPM 的速度将细胞离心 7 分钟，洗涤沉淀以去除任何痕量血清，然后将第二个沉淀重悬于 PBS 中。

计数后，将细胞以每 150 微升浓度 500， 000 个分装到冰上的无菌微量离心管中。然后用 35 毫升 PBS 和另一个 50 毫升锥形管填充 70% 乙醇，并在每个锥形管中浸泡棉签。当每只动物的所有工具都准备好后，将眼药膏涂抹在动物的眼睛上。

然后用胶带轻轻地将麻醉鼠标固定在加热垫上，并通过捏住脚趾确认镇静。使用浸有乙醇的棉签清洁剃须区域，然后用手术刀刀片在第四个和中线之间做一个小切口。将浸有 PBS 的棉签插入切口中，形成一个口袋，然后用镊子露出一个记忆脂肪垫，可以通过其白色来检测。

用另一把镊子挤压其底部的脂肪垫，使组织完全暴露。然后将腺癌细胞上下移液几次，制成均匀的细胞溶液，并将 150 微升细胞轻轻吸出到胰岛素注射器中。小心水平握住注射器，针孔朝上。

将细胞注射到乳腺脂肪垫中，通过组织肿胀确认注射成功。然后轻轻松开脂肪垫，用蚊子钳缝合切口，将缝合线绕蚊钳按顺时针、逆时针和顺时针方向转动，打三个结。手术后，注射镇痛药并将每只动物置于单独笼子中的胸骨卧位，监测小鼠直到它们完全康复。

细胞植入后 8 周，小鼠准备器官采集。将动物固定在泡沫底座上，并使用卡尺测量肿瘤体积。接下来，做一个长长的垂直中线切口，然后在前腿正下方和后腿上方做两个水平切口。

将皮肤固定在泡沫上以暴露肿瘤，然后用剪刀将肿瘤从皮肤上分离出来。然后轻轻取出肺，将左肺放入 Bowen 溶液中三天，之后这种浅表转移性 folky 将变得肉眼清晰可见，将部分组织快速冷冻在液氮中，以便以后分离 RNA，并将肿瘤的剩余部分放入一个装满福尔米蛋白的锥形管中。接下来，通过心脏穿刺处死动物后，将 450 微升血液样本分配到含有 50 微升 3.2% 柠檬酸钠的微量离心管中，然后旋转红细胞并将血浆样本储存在零下 20 摄氏度，直到进一步使用实验错误，例如细胞接种不精确或渗漏可能导致肿瘤大小变化，甚至没有肿瘤，从而导致形成一个看起来类似于记忆的结构。

脂肪垫注射对照缓冲液。肿瘤的生长速度也取决于注射细胞系的性质，通常可以通过小鼠的皮肤观察到。此外，肿瘤周围区域可能显示由血管重塑产生的大血管，这些血管可能在清除废物和为肿瘤组织提供营养和氧气方面发挥关键作用。

与体外实验不同，由于缺氧和缺乏营养，肿瘤细胞的生长速率在体内的时间上可能不是恒定的。周围组织内可能会形成坏死区域，这些区域会影响肿瘤的生长速度。此外，表达特定目标基因的注射细胞可能会影响癌症进展，因为这些基因可能会诱导肿瘤生长，肿瘤生长开始迅速，但在结束时减慢，反之亦然。

Bowen 溶液中收集肺有助于可视化浅表转移病灶，其表现为肺组织表面凸起的苍白形成。病灶的形成是细胞系依赖性的。非侵袭性细胞可能仅引起微转移，这可以通过石蜡包埋的肺组织上的 h 和 e 染色轻松识别。

在此程序之后，可以执行 Eliza 等其他方法来回答其他问题，例如，实验性肿瘤的生长如何影响血浆中细胞因子或促血管生成分子的水平。