大鼠血清适用于哺乳动物全胚胎培养的制备
August 3rd, 2014
哺乳动物全胚胎培养 （WEC） 广泛用于畸形学和发育生物学。立即离心的大鼠血清通常作为小鼠和大鼠 WEC 的培养基提供。在本视频中，我们演示了制备适用于哺乳动物 WEC 的高质量大鼠血清的标准方案。
记忆农业是一种广泛使用的技术，用于检查发育中的小鼠和大鼠胚胎的药理毒性，并解决发育过程的机制。从雄性大鼠制备的大鼠血清 Immediate cent fields 已常用于全农业培养基。如果农业胚胎作为与植入组织阶段相反，即在小鼠中 E 0.0 之前，或在 RUS 合成培养基中补充 E 10.0，补充有 IIC 大鼠血清，则通常用作全 EMBR 培养的培养基。
然而，为了在妊娠中期培养胚胎更长的时间，应使用 100% 杆状血清作为合适的培养基，因为没有其他替代培养基可以让胚胎在体外正常生长超过两天。与血液样本的延迟离心相比，溶血性红血清假设汽车胚胎的正常生长。马上。离心可以减少溶血，因为大多数红细胞在素蛋白 cr 形成之前被分离。
因此，立即化酶对于制备适合 Hor 培养的红色血清至关重要。在本视频中，我们直接演示了我们制备大鼠血清的标准方案。对于血液采集，我们使用无扩散的特定病原体。
多利大鼠雌性大鼠不应用于制备表面血清，因为雌性动物的激素水平变化，根据 esra 循环和紫菀激素的这种变化不适合于每培养。在采集血液之前，必须将雄性大鼠禁食至少 18 小时，以规范血流中的葡萄糖含量浓度，将 aslu 雨放入连接到 antheia 装置的盒子中，然后将大鼠转移到盒子中 引入 antheia 通过检查对杆上刺激的反应丧失来确认麻醉 用镊子检查对刺激的反应丧失 用面罩盖住大鼠的鼻子 连接到麻醉装置以深采集血液时对大鼠进行茴香处理，将 70% 乙醇倒入茴香大鼠腹部对皮肤进行消毒。为避免污染皮毛鼻子，用一对水龙头捡起下部区域的皮肤和腹壁，然后用一把大剪刀同时向胸部区域切割这些层，露出内部器官，用一对 fps 将肠道反射到腹腔外。
此外，用一把大剪刀将皮肤和腹壁朝后肢切开，以进一步露出腹腔外多余脂肪较少的后腹部区域，用两对镊子夹起中线的内脏脂肪，并沿平行方向小心地分割脂肪。要暴露腹部上部，请重复此海报以在纵向上分裂 B 细胞 FE 以轻松识别腹部上部的分叉。用两对 fps 无忧无虑地在腹部 ter 和分叉处捡起 fetch，然后将 fetch 分离到腹部 aar 上。
血液从腹部末端得到纠正，较细的血管位于较粗的静脉旁边。无忧无虑。将连接到注射器的针尖插入腹腔的分叉处，VL 向下。一只手握住注射器，慢慢推动范围以采集血液。
您可以从一只雄性大鼠收集大约 15 毫升的血液样本，通过切除和切开心脏或斩首对一只大小大鼠实施安乐死。从注射器中取出针头。将血液倒入冰芯试管中。
冰上的关键血液样本，直到第一次离心以延缓血凝块的形成。集体血液样本在室温下离心 5 分钟，以将血液分成上层和下层。检查血样分离情况，并将试管置于 4 度 2 小时。
为了固定 F 凝块，纤维蛋白凝块出现在上层。第一次离心后，用一对弯曲的镊子拿起纤维蛋白块，挤压外套以分离血清。然后用镊子将纤维蛋白胯部向下压在两层之间的界面附近。
重复此步骤以进一步分离昏暗的作物，以便可以通过离心收集血清。再次离心试管以校正血清 5 分钟。在室温下，Carefree 使用一次性移液器将血清转移到新试管中。
在层状气流柜中，从 15 毫升血样离心机中获得大约 6 毫升血清，A 收集红色血清 5 分钟。为了进一步去除残留的红细胞，使用移液管将血清无忧无虑地倒入新管中，以避免被残留的红细胞污染，因为管子的模式是将血清在 56 度的水呼吸中孵育 30 分钟。要灭活补体系统，请将红色血清的试管巡航到房间。
Temperature 是 lanar 气流柜。血清应在单个类固醇管中包被至 10 毫升。将试管存放在零下 20 度直至使用。
使用这种速溶离心大鼠血清，我们可以在全胚培养中获得良好的结果。这是从 E 12.5 天开始培养 24 小时的红胚胎的情况，对应于小鼠中的 E 10.5。这是另一个案例。
从同一阶段培养 46 小时的红色胚胎。血清制备中最关键的问题是溶血。如果采集的血样显示严重溶血。
血液不能通过离心分离成两层。由于溶血往往是由力压引起的，因此在采血时应缓慢拉动应变。我们还需要检查纯化血清的颜色，以判断从离心上层收集血清后的溶血程度。
用于家庭培养的理想红色血清通常呈浅黄色，而轻度溶血的红色血清呈粉红色。将收集的血液倒入试管中时，避免冒泡的血液会增加溶血，这一点很重要。迄今为止，已经报道了几项通过结合化学定义的中位数在激素培养中使用商业红血清的研究。
然而，目前尚不清楚这些 Combinator 培养基是否适用于后期培养的大鼠和小鼠胚胎，例如小鼠的 E 11.5 至 E 12 5 以及大鼠的 E 13.5 和 E 14.5。有时，使用各种替代培养基代替红色血清来培养妊娠中期的胚胎。例如，无血清培养基可支持 E 10.5 小鼠胚胎培养 16 至 40 小时。
螨虫和那些神经节等主要结构在这些培养胚胎中似乎是正常的。然而，另一项研究表明，在这种培养基中测试的胚胎中有 60% 在 18 小时后表现出正常发育，但再培养 20 至 22 小时的胚胎的良好发育范围下降到 30% 至 40%与这些研究相比，我们可以成功再现小鼠和大鼠胚胎的良好发育， 在 100% IC 大鼠血清中培养，使用我们的方案培养两天，从大鼠的 E 12.5 或小鼠的 E 10.5 开始大约 48 小时，每天更换一次培养基。因此，我们相信我们制备 IC 大鼠血清的方法可用于各种实验，在不同的 Embry 阶段应用 Merian HO 培养物。
因此，我们希望我们的视频协议能够帮助新研究人员在他们自己的实验室中开始整个农业。祝你好运。
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概述
本文介绍了一种用于制备高质量大鼠血清以用于哺乳动物全胚胎培养（WEC）的协议。该方法旨在提高体外培养期间胚胎的活力，这对发育生物学研究至关重要。
关键研究组成部分
科学领域
- 发育生物学
- 致畸学
背景
- 哺乳动物全胚胎培养（WEC）对于研究胚胎发育至关重要。
- 大鼠血清常用作小鼠和大鼠胚胎的培养基。
- 立即离心大鼠血清有助于减少溶血，从而提高胚胎活力。
研究目的
- 展示制备WEC大鼠血清的标准协议。
- 确保血清支持体外胚胎的正常生长。
- 解决其他培养基在长期胚胎培养中的局限性。
使用的方法
- 收集大鼠血样。
- 离心血液以分离红细胞。
- 制备适合胚胎培养的血清。
- 在全胚胎培养实验中使用制备好的血清。
主要结果
- 高质量的大鼠血清支持胚胎长时间生长。
- 立即离心可最大限度地减少溶血并提高血清质量。
- 在制备好的血清中培养的胚胎显示出比其他培养基更好的活力。
结论
- 正确的大鼠血清制备对于成功的WEC至关重要。
- 该协议可应用于增强发育生物学研究。
- 未来的研究可能探索不同应用的血清制备变化。
常见问题
Executive Industry Relevance
Preparation of high-quality rat serum is critical for reliable mammalian whole embryo culture, a key model in developmental toxicity screening and mechanistic target validation. Immediate centrifugation minimizes hemolysis, ensuring serum consistency and supporting predictive confidence in embryo-based assays. This protocol enables reproducible ex vivo culture of midgestation embryos, facilitating early-stage pharmacological screening and pathway interrogation in discovery pipelines.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of therapeutic hypotheses in a physiologically relevant embryo system.
- Operational Value: Provides a standardized serum source that reduces variability in developmental phenotype readouts.
- Predictive Value: Supports mechanistic de-risking by allowing assessment of compound effects on embryonic growth and morphogenesis.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Prepares a defined biological system for evaluating compound-induced developmental toxicity.
- Operational Value: Ensures serum batch consistency through immediate centrifugation and heat inactivation, improving assay reproducibility.
- Scalability: Serum can be prepared in batches and stored frozen for repeated use in screening campaigns.
Translational & Preclinical Research
- Translational Continuity: Bridges in vitro findings to in vivo relevance by using a serum system that supports normal embryo development ex vivo.
- Risk-Adjusted Advancement: Enables early identification of embryotoxic liabilities, informing lead optimization decisions.
- Disease-Relevant System: Rat serum supports culture of rat embryos, a model with gestational timing closer to human organogenesis than mouse.
Pipeline & Workflow Integration
This serum preparation method fits within the discovery biology workflow, providing a reliable culture medium for embryo-based assays used in target validation and lead identification stages.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing on developmental pathways using a serum that maintains embryo viability for extended culture periods.
- Screening: Delivers a standardized, low-hemolysis serum enabling quantitative assessment of compound effects on embryonic growth.
- Analytics: Facilitates measurable outcomes such as embryo survival, morphology, and growth rate as dependent variables in toxicity screening.
- Translational Research: Uses rat serum to culture rat embryos (E10.0–14.5), a system with translational relevance to human developmental processes.
- Enterprise Reuse: The protocol establishes a reusable serum preparation capability applicable across multiple embryo culture projects.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Reduces mechanistic ambiguity in developmental toxicity assays by providing a consistent, high-integrity culture medium.
- Operational Value: Standardizes serum preparation through immediate centrifugation, clot removal, and heat inactivation, minimizing batch-to-batch variability.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision confidence in early discovery by reducing false negatives from serum-induced embryo stress.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of compounds based on reliable embryo culture outcomes.
Implementation Considerations
- Requires expertise in rodent handling, blood collection, and aseptic serum processing.
- Depends on access to centrifuges, sterile forceps, pipettes, and heat-block or water bath for 56°C incubation.
- Necessitates standardization via male rat use and 18-hour fasting to minimize hormonal and metabolic variability.
- Requires adaptation consideration when applying to mouse embryo culture, though serum is cross-reactive.
- Limited by the perishable nature of serum and need for cold-chain storage at –20°C.
