幼虫活动的测量果蝇活动监视器

本报告描述了一种使用 TriKinetics 果蝇活动监视器测量果蝇幼虫活动的方法。该设备采用红外光束来检测多达 16 只动物的运动。可以分析数据以表示运动参数，包括速率和动物在分析室内的位置。

该程序的总体目标是在不使用复杂的视频分析软件的情况下分析幼虫活动。这是通过首先将选定的幼虫转移到网状过滤器中以清除碎屑来实现的。接下来，将单个幼虫转移到检测管中，在那里它们被螺旋塞固定，螺旋塞插入果蝇活动监测器或 dam 装置中。

驯化 3 到 5 分钟后，从 DAM 系统获取录音进行分析。最终，dam 测量的幼虫运动可用于分析给定基因型的不同活动参数。与现有方法相比，该技术的一个优点是它是自动化和客观的。

虽然对于常规活动测量来说足够简单，但许多实验室已经拥有必要的设备，可以很容易地适应幼虫。演示该程序的是我实验室的本科生 Aiden McFarlin。该协议使用 M 5 多光束果蝇活动监测装置或 dam。

建立大坝。首先，使用 CAB six 电话线将显示器连接到电源接口单元或 PSIU。然后将 PSIU 连接到电源插座。

绿灯将指示适当的连接。第三，通过 USB 数据线将 PSIU 连接到计算机以进行数据记录。现在在计算机上安装并打开 DAM 系统 MB one V six X 程序。

当软件打开时，它会自动开始在软件控制器中记录数据。对于 dam，请设置所需的记录间隔。选择 首选项 ，然后单击读取间隔选项的上方或下方，以选择存储数据的不同时间范围。

preferences 和 output data type 下，还可以设置各种其他参数。每个参数都提供了对管内幼虫活动的独特分析。建议在数据收集之前选择所有参数。

如果您不确定要测量的参数 对于此检测，请准备一个小瓶，其中包含觅食幼虫 对于要检测的每种基因型。使用标准环境和苍蝇食物来准备检测管。将 4% 螺旋溶液倒入培养皿中，深度为 1.5 厘米。

这成为检测管的塞子材料，太密而无法钻入。接下来，用热水清洗管子，确保管子干净无阻。接下来，用 100 毫升水在微波炉中加热挤压瓶 10 到 15 秒或直到出现冷凝水。

然后倒置瓶子，轻轻地将温暖潮湿的空气挤入检测管中。当管壁上出现一层薄薄的冷凝水时，它就足够潮湿了。接下来，从培养皿中取出凝胶盘并将其放在网状表面上，它不会紧紧粘附在网状表面上。

要收集幼虫，通过在漏斗上拉伸丝网级尼龙网来准备网状过滤器。用橡皮筋将网片固定在漏斗颈处，并将漏斗放在烧杯中。现在从培养瓶中舀出一把装满食物的抹刀，里面装满了觅食幼虫的食物，然后将它们转移到网状过滤器中。

使用室温、自来水清洗幼虫上的食物，可以使用画笔从网眼上收集单个幼虫。将幼虫转移到潮湿的检测管中约 1.5 英寸。然后用螺旋钻塞住管子，将其密封。

这是通过将试管的一端压入凝胶两次，然后将另一端压入凝胶来完成的。一旦压力迫使两个塞子中的一个从另一端拔出，当管子被加载时，将它们放入坝中。接下来，调整每根管子的位置，使动物不能超出传感器的范围。

然后使用油灰环将管子固定到设备上。在 20 摄氏度的培养箱中记录 LARVAS 活性，以防止由于阴影、荧光灯或实验室温度变化而可能导致读数不准确。在孵化器中。

录制期间使用 LED 照明，而不是荧光灯。在收集数据之前，让幼虫适应 5 分钟。在没有任何动物的情况下进行试验以确保光照条件不会触发 DAM 传感器可能很有用。

五分钟后，启动预配置的 DAM 软件以启动录制。检测可以持续 30 分钟，无需额外的冷凝或食物。在记录之前，必须在 preferences 下选择用于分析的活动参数。

如果未选中，则此活动将不可用于事后分析。完成所需的录制时间后，关闭 DAM 软件，数据将自动保存在 dam 系统数据文件夹下。将数据文件传输到单独的文件夹，以便以后进行处理。

可以用沸水清洗检测管以重复使用。要将原始数据处理为可理解的格式，请打开 DAM 文件扫描应用程序并选择。选择输入数据文件夹，然后选择数据文件夹和所需文件，然后选择扫描选项。

最后，选择所需的读取周期的 bin 长度。这会将原始数据组织到作员设置的参数中。现在选择输出数据类型以分析所需的运动设置。

如果 bin 长度大于所选的系统读取间隔，则转到 extra readings 菜单下，然后选择选项 two sum into bins。接下来，将文件以适当的名称保存在原始数据传输到的同一文件夹中。使用标准电子表格程序打开保存的文件。

根据分析的数据类型，必须以不同的方式读取电子表格。通常，为了测量移动或计数，研究的时间段将以数字方式记录，而每个单独的阅读管将收到一个指定的字母。通常，K 到 Z 列代表检测管的插槽，行代表收集的数据点。

例如，如果收集了 20 分钟的移动，则在一分钟内，间隔将 20 行平均化，以计算每分钟的平均移动数和其他测量值。使用监测设备对 W 1 1 1 8 菌株的 3 龄幼虫进行温度响应研究，以检测幼虫、运动的差异。在 7 个不同的温度下，对每只幼虫进行 20 分钟的分析。

显然，随着环境变暖，幼虫明显变得更加活跃。为了进行比较，对 W 1 1 18 菌株的减退突变体进行了测试，称为非活性突变体。分析表明，不活跃的幼虫的移动性明显低于对照，以测试测定的检测限。

对不同阶段的幼虫进行了比较，而星形幼虫的幼虫比第三阶段的幼虫小得多。星幼虫中第一和第二的活动确实是可检测和测量的，可以观察设备中活动随时间的变化。结果发现，在 20 分钟的测定中，星幼虫中 third 的活性在每分钟保持相对一致。

一旦掌握，该协议提供了一种准确、简单、经济高效的方法来评估各种实验条件下幼虫活动的基本参数。