在癌神经侵袭的体外模型:背根神经节型号

该模型的总体目标是概括癌变的神经微环境。这使得能够探索癌细胞神经元相互作用。这种方法可以帮助回答肿瘤微环境领域的关键问题，例如肿瘤细胞和神经元之间的相互作用以及每组的相互影响。

该技术的主要优点是可靠、易于执行并解决神经生态位中的细胞和脑因子。该技术的意义延伸到整个癌症发展过程中神经重塑和侵袭过程中关键因素的治疗开发和药理学靶向。在 CO2 室中对动物实施安乐死后，用 70% 乙醇浸泡毛皮并晾干。

将鼠标固定在俯卧位置，然后从颈后部向颅尾方向延伸至腰椎的中线切口。接下来，使用镊子抬起双侧真皮瓣并暴露皮下组织。触诊小鼠头骨，直到确定颅颈交界处。

使用垂直于动物的角度的剪刀在颅颈交界处剪断颈椎肌肉和脊柱。然后，解剖脊柱尾部，用剪刀在第五腰椎处进行完整的尾部横切。接下来，将鼠标置于仰卧位，沿着从颈部到腹部的中线切开后，横向缩回皮肤，然后切开腹膜。

在颅骨上，用剪刀打开胸壁。切除腹膜和腹膜后器官后，使用镊子和手术刀片切开肋骨，留下大约 5 毫米的肋骨从脊柱突出。从身体的其他部分去除脊柱。

并用冷 PBS 洗涤两次。在配备 4 倍放大倍率的立体显微镜下，将脊柱朝上以相同的颅尾方向放置在非粘附吸收平台上。通过这种立体显微镜观察时，去除任何脊髓肌肉和结缔组织。

将肋骨用作神经的标志，因为它们离开脊柱。DRG 位于颈椎、胸椎和腰椎。用剪刀在中线处剪断椎体，为脊髓创建一个窗口，然后轻轻缩回椎体，露出脊髓和 DRG 根。

接下来，使用弹簧剪刀去除上肋以露出 DRG。沿 DRG 外侧肋骨内侧沿周围神经内侧追踪。识别 DRG，它可以被描述为看起来像躺在神经上的煎蛋的蛋黄。

切开 DRG 远端的肋间神经，在神经节远端留下 2 到 3 毫米的神经用于回缩。使用镊子小心地抓住传出神经，不要挤压或损坏 DRG。现在通过横向拉动神经对 DRG 进行轻柔的回缩。

然后切下靠近 DRG 的前后根。将分离的 DRG 转移到装满冰冷补充 DMEM 的 35 毫米培养皿中。在层流罩中工作，将 35 毫米玻璃底培养皿放在冰上的纸网格上。

使用预冷的移液器吸头，在网格中心分配大约 10 微升耗尽生长因子的 ECM。在 2 到 4 倍放大倍率下通过立体显微镜观察培养皿时，将 DRG 放在靠近培养皿底部的 ECM 中心。从汇合培养物中收获和洗涤 40， 000 个感兴趣的癌细胞后，将沉淀和 40 μL ECM 重悬于冰上。

再次通过立体显微镜观察网格，从 DRG 测量 500 微米，并在此时分配 10 μL 细胞悬液。从 DRG 向所有方向重复。将培养皿放在层流罩中 10 到 15 分钟以凝固但不要变干。

一旦 ECM 凝固，通过靠着板的侧壁移液慢慢添加补充的 DMEM。加入大约 2 毫升的培养基，足以覆盖 ECM。DMEM 的添加应非常缓慢地进行，方法是靠着板的侧壁移液，以避免 DRG 从板底部分离。

将板放在组织培养箱中，并按照方案书面部分中的说明保持培养。该显微照片显示了接种后第 0 天的视野顶部的 DRG 和视野底部的癌细胞。在这里，相同的培养物在接种后 7 天显示。

如箭头所示，癌细胞沿 DRG 神经元迁移。该直方图显示了不同类型癌细胞的 DRG 神经侵袭指数。可以看出，Kpc 989 和 MiaPaCa 细胞的神经侵袭指数高于 QLL2 或 NIH3T3 细胞。

该坐标图描绘了 Kpc 癌细胞与神经接触的迁移路径（以红色表示），QLL2 细胞以紫色表示。将显示 X 和 Y 坐标。该图显示了从原点距离对轴突接触迁移 QLL2 癌细胞的分析。

这里显示了 Kpc 癌细胞的起源距离。在每种情况下，迁移方向都是朝向神经节。在尝试此程序时，重要的是要记住准备比所需更多的神经节，因为检查率不是 100%发育后，DRG 动机为癌症研究领域的研究人员探索肿瘤微环境中的神经生态位铺平了道路。

观看此视频后，您应该对如何识别小鼠中的 DRG 等解剖标志、提取 DRG 以及最后如何在 DCM 中培养它有一个很好的了解。还介绍了 DRG 与癌细胞的共培养。