心肌梗死新生小鼠，心肌再生的模型

该方案描述了一种高度可重复的心脏再生模型，通过手术诱导出生后第 1 天小鼠的左心室心肌梗死。该方法包括诱导低温麻醉和结扎左冠状动脉前降支。

该外科手术的总体目标是可重复地诱导新生小鼠心肌梗死。这种方法可以帮助回答心脏再生中的关键问题，例如哪些机制支持新生儿再生以及心肌梗死后如何促进成人心脏再生。该技术的主要优点是可以可视化左冠状动脉前降支 （LAD），以确保在新生小鼠心脏中实现高度可重复的 LAD 结扎。

LAD 结扎后心脏功能的变化可通过超声心动图评估。在开始手术之前，将麻醉的幼崽置于手术显微镜下的冰上右侧卧位，并通过对脚趾和尾部挤压无反应来确认适当的镇静水平。然后用聚维酮碘轻轻消毒胸部，然后用乙醇棉签消毒。

接下来，用一把镊子小心地提起剑突和左腋窝之间的皮肤，并在左前腿下方几毫米处做一个切口。用剪刀剪开下面的胸肌层，然后沿着第四肋间隙的肌肉和肋骨打开一对镊子，进行轻柔的胸腔切开术。可视化左冠状动脉前降支从肺静脉后面的左耳廓发出，下降到心脏大静脉之外。

冠状动脉的位置对于该技术的可重复性至关重要。为确保动脉的可视化，在手术过程中将小鼠体温保持在 8 到 15 摄氏度之间。然后使用直径为 007 mL 的针头将 11-0 尼龙缝合线穿过左耳廓下方的中心室，穿过动脉下方并结扎动脉。

缺血通过缝合部位下方心肌的褪色来确认。接下来，使用直径为 0.15 mL 的针头放置两个 8-0尼龙肋骨缝合线无需打结，以确保两根缝合线的放置不会伤害肺部等内脏器官。然后系好肋骨缝合线以闭合胸廓切口，并将鼠标移动到 37 摄氏度加热垫上的无菌手术毛巾上。

用更多的 8-0 闭合肌肉和皮肤尼龙缝合线。然后用乙醇棉签轻轻去除聚维酮碘和血液。当动物从麻醉中完全恢复后，用养母笼子里的被褥擦拭，以减少母体排斥和蚕食的机会，并将幼崽送回养母。

每 10 到 15 分钟观察一次养母对幼崽的行为，持续 2 到 3 小时，以确认幼崽是否被接受。为了在与养母在一起 4 到 6 小时后测量心肌梗塞的大小，通过异氟烷过量对幼崽实施安乐死，然后斩首。接下来，抓住下肋骨，沿着从横膈膜到腋窝的左腋中线纵向切开肋骨和肌肉组织。

以横向角度握住剪刀，小心地从左侧到右侧切开隔膜。然后抓住肋骨，沿着右侧腋中线切开右侧肋骨和肌肉组织。使用剪刀去除与心脏的所有血管连接。

然后抓住心脏的底部，将其从胸腔中取出。使用手术碳钢剃须刀片，在缝合线和心尖之间的中点沿短轴切割心脏，然后在缝合处进行第二次切割。然后将切片在室温下置于 1% TTC 中 10 至 15 分钟，仔细观察标本以避免过度染色。

LAD 手术后 24 至 48 小时，通过超声心动图评估心脏功能。将幼犬固定在加热码头上的仰卧位，鼻子位于麻醉锥中，并将预热的回声凝胶涂抹在左胸区域。接下来，使用 40 Mhz 超声探头获得缝合线下方左心室的胸骨周围长轴视图。

然后将探头旋转 90 度并获取记录终末模式超声心动图图像的胸骨旁短轴视图。舒张末期和收缩末期左心室内径可以从短轴末模图像中测量。心肌梗死后 3 天的组织学检查可观察到梗死的典型证据，包括炎性细胞浸润。

第 7 天，左心室组织恢复正常，到 21 天时，心脏组织已完全再生。在总共 13 例左冠状动脉前降支结扎手术中，100% 的心脏梗死，平均梗死面积为 36%为了进一步确认梗塞诱导超声心动图可以在手术后 24 小时和 48 小时进行。在这个代表性实验中，心肌梗死后 24 小时射血分数和分数缩短显着降低。

到 48 小时时，与对照动物相比，射血分数和分数缩短进一步降低，对照动物完全没有降低。一旦掌握了这项技术，如果执行得当，可以在 10 到 15 分钟内完成。在实施心肌梗塞时，重要的是要记住快速准确地作，以确保在 LAD 可见的时间窗口内完成手术。

在此程序之后，可以执行其他方法（如组织学分析）来回答有关不同治疗方法如何影响心脏再生的其他问题。这项技术的发展为心脏生物学领域的研究人员探索小鼠的心脏再生铺平了道路。观看此视频后，您应该对如何通过可视化和结扎 LAD 来可重复地诱导新生小鼠心肌梗死有很好的了解。