生物血管内送货到大鼠肾脏

该程序的总体目标是将生物制剂直接输送到肾动脉中，以便在大鼠的肾微血管隔室中诱导局部治疗效果。与现有方法（例如全身施用抗炎或抗纤维化药物）相比，该技术的主要优点是肾内给药技术最大限度地减少了任何潜在的全身副作用。该技术的意义延伸到各种肾脏病变的治疗，因为肾脏微血管功能涉及广泛的肾脏疾病。

在肾损伤的进展中起关键作用。为了准备手术，首先对所有手术器械进行高压灭菌。麻醉大鼠后，根据文本协议，将动物转移到受控加热垫上，以保持动物的体温在 37 摄氏度。

在每分钟 1 升氧气中使用 1% 至 2% 的异氟烷以维持麻醉。皮下注射镇痛药，并涂抹眼药膏以防止干燥。为了补偿体液的流失，皮下注射每公斤 10 毫升 0.9% 生理盐水。

然后，剃掉腹部区域，并使用聚维酮碘和 70% 乙醇垫清洁皮肤。手术开始时，通过监测身体反射（例如因脚趾捏而退出），确保镇静深度足够。使用 10 号手术刀刀片通过一个小的中线切口进行剖腹手术。

用棉签将肠道和结肠拉至腹部右侧，用无菌纱布覆盖，浸泡在 0.9% 生理盐水中，以保持器官湿润。轻轻向上缩回脾脏、肝脏、胃和胰腺，露出主动脉和左肾动脉。接下来，在手术显微镜下，使用钝器解剖弯曲的镊子，沿血管长度和无菌棉签重复打开闭合运动，小心地将左肾和左肾动脉上方和下方的腹主动脉与静脉、脂肪和周围的结缔组织分开。

使用棉签有助于避免对神经和受感染的血管造成损伤，尤其是对薄壁静脉的损伤。然后，在主动脉下方放置 4-0 丝缝合线，并使用微血管夹，夹住肾动脉分叉处上方和下方的主动脉。现在，使用 24 号静脉导管，在左肾动脉分叉水平穿刺主动脉，然后小心地将导管推进肾动脉。

由于肾动脉体积小，导管可能会刺穿血管。在手术显微镜下工作并尽可能平行于动脉插入针头非常重要。然后，将装满药物溶液或生理盐水的注射器连接到导管上，并大量喷洒肾脏。

充血后，立即使用微血管夹夹住左肾静脉和左输尿管，然后拔除导管。然后，将一块可吸收的止血明胶海绵和一小滴组织粘合剂放在主动脉的穿刺区域，并用棉签轻轻施加压力。同时，从左肾动脉分叉处下方的主动脉松开夹子。

5 分钟后，从肾静脉和输尿管上松开夹子。小心地从左肾动脉分叉处上方的主动脉上松开夹子，让肾脏再灌注。总肾缺血持续时间不应超过 7 分钟。

在确保没有活动性出血后，再密切观察该区域 10 分钟后，使用 4-0 可吸收缝合线和连续模式以防止感染，并将腹部切口分成两层闭合。在切口区域涂抹局部抗生素软膏以防止感染。然后，将大鼠转移到温暖垫上的观察笼中，直至完全恢复。

完成所有研究后，根据文本协议对动物实施安乐死。将两种不同剂量的重组大鼠 VEGF 或 PBS 作为对照注射到大鼠体内，然后在手术后 8 小时对动物实施安乐死，以检查 VEGF 通路的激活。如图所示，通过 H&E 染色，与对照器官相比，外科手术不会影响灌注肾的形态。

此外，与对照组织相比，严重的红色染色未显示响应缺血时间和 rrVEGF 输注的细胞外基质沉积增加。最后，通过 Western blot 分析，观察到参与 VEGF 通路的蛋白质表达略有但显著增加，包括 VEGF 、 FLK-1 、 磷酸化 AKT 和 AKT 以及 磷酸化 ERK 和 ERK 。一旦掌握，如果执行得当，这项技术可以在大约 45 分钟内完成。

在尝试此程序时，重要的是要遵循动物护理和使用的机构和国家指南，特别是通过服用镇痛药来减轻疼痛和不适。在此程序之后，可以进行其他方法，例如 Western blotting 或肾脏组织学染色，以确定不同疗法的疗效以及特定途径的激活。