Name: 毛细管电泳监视肽接枝壳聚糖膜实时 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 5 s
Description: 学习使用自由溶液毛细管电泳技术实时监测肽接枝壳聚糖膜的反应过程。该方法无需样品前处理，可精确分析反应动力学，为生物材料研究和药物递送系统开发提供重要技术支持。

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MG、MO'C 和 PC 感谢西悉尼大学（WSU）分子医学研究小组提供的研究种子基金，同时感谢西悉尼大学的 Michele Mason、西悉尼大学先进材料表征中心（AMCF）的 Richard Wuhrer 以及蒙彼利埃大学的 Hervé Cottet 在讨论中提供的帮助。

1. 壳聚糖薄膜的制备
<ol>
	<li>称取 2 g 冰醋酸，用超纯水定容至 100 ml。</li>
	<li>称取 1.7 g 壳聚糖粉末，加入 100 ml 质量分数为 2% 的乙酸水溶液。在室温下，使用磁力搅拌子和磁力搅拌器搅拌 5 天，可选择用铝箔覆盖或避光进行。</li>
	<li>将壳聚糖分散液在 23 °C 下以 1,076 × g 离心 1 小时。用注射器收集上清液，弃去沉淀物。</li>
	<li>在室温下，将 10 ml 壳聚糖悬浮液分装至每个 9 cm 的塑料培养皿中，用于制备每张薄膜。将薄膜盖好，静置干燥至少 7 天。</li>
	<li>用剪刀将干燥后的薄膜剪成 1 × 1 cm 的正方形。注意：实验可在该步骤暂停。</li>
</ol>
2. 磷酸盐缓冲液（PBS）的制备
<ol>
	<li>称取 8 g 氯化钠、0.2 g 氯化钾、1.44 g 磷酸氢二钠和 0.24 g 磷酸二氢钾。</li>
	<li>将称取的化学试剂溶解于 800 ml 超纯水中，并用浓盐酸将溶液滴定至 pH 7.4。 
	注意：实验可在此步骤暂停。</li>
</ol>
3. 制备 pH 9.2 的 75 mM 硼酸钠缓冲液
<ol>
	<li>称取 3.0915 g 硼酸，溶于 75 ml 超纯水中。</li>
	<li>用浓度为 10 M 或更高的氢氧化钠溶液滴定硼酸溶液，调节 pH 至 9.2。 
	注意：浓氢氧化钠溶液具有腐蚀性，操作时应佩戴手套。</li>
	<li>用超纯水定容至 100 ml，得到 500 mM、pH 9.2 的硼酸钠缓冲液。</li>
	<li>将 500 mM 硼酸钠缓冲液用超纯水稀释至 75 mM 硼酸钠缓冲液。注意：实验可在此步骤暂停。</li>
</ol>
4. 用于接枝反应的壳聚糖薄膜的制备
<ol>
	<li>在室温下，将10片方形壳聚糖膜（1 × 1 cm）置于培养皿中，用5 ml磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗2小时。</li>
	<li>在此期间，准备并校准毛细管电泳仪（步骤5）。</li>
</ol>
5. 毛细管电泳仪的准备与验证
<ol>
	<li>使用钝头工具在长度为43.5 cm、内径为50 µm的裸熔融石英毛细管（43.5 cm为总长度，至检测窗口的有效长度通常为35 cm）的设定位置刮擦其外部聚合物涂层，使其变弱，然后折断毛细管。
	<ol>
		<li>在距离进样端8.5 cm处用打火机烧去毛细管的聚合物涂层以形成检测窗口，冷却后用乙醇擦拭干净；再用打火机在毛细管两端各烧去数毫米的涂层，冷却后同样用乙醇擦拭干净。</li>
		<li>将毛细管放入检测窗口中，并将其等长地置于进样端和出样端，缠绕在卡匣的轴芯上，安装至毛细管电泳仪的毛细管卡匣中，然后将卡匣装入毛细管电泳仪器。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>为每次分离设置方法参数。在软件菜单中选择“方法”，然后选择“编辑完整方法”，设定分离所用的温度、时间、电压和样品瓶（例如25 °C、10 min、30 kV）。
	<ol>
		<li>在预处理步骤中，设定连续冲洗程序：对于一系列分析中的第一个方法，依次用1 M氢氧化钠（水溶液）冲洗10 min，0.1 M氢氧化钠（水溶液）冲洗5 min，超纯水冲洗5 min，以及75 mM pH 9.2的硼酸钠缓冲液冲洗5 min。</li>
		<li>对于后续的方法，在预处理步骤中设定连续冲洗程序：依次用1 M氢氧化钠（水溶液）冲洗1 min，75 mM pH 9.2的硼酸钠缓冲液冲洗5 min。</li>
		<li>在进样步骤中，为所有方法设定参数：采用30 mbar压力进行10秒的流体动力学进样。在分离步骤中，为所有方法设定分离条件：30 kV电压，25 °C下分离9 min。 
		注：请参考特定毛细管电泳仪器的用户手册，因不同制造商的操作流程可能有所不同。1 M氢氧化钠溶液需当天配制。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>进样并分离一种中性内标物（将10 µl体积分数10%的二甲基亚砜（DMSO）水溶液稀释于450 µl的75 mM硼酸钠缓冲液中）；然后以相同方式进样并分离一种寡聚丙烯酸酯标准品（以超纯水配制成10 g∙L-1的溶液；参见材料列表），以验证毛细管的有效性。在此暂停运行序列，直至接枝反应准备就绪开始。</li>
</ol>
6. 将RGDS接枝到壳聚糖薄膜上
<ol>
	<li>称取肽（1 mg RGDS）和偶联剂（3 mg EDC-HCl 和 2 mg NHS）。</li>
	<li>在壳聚糖膜浸入PBS 2小时后，将多肽和偶联剂溶解于5 ml PBS中。
	<ol>
		<li>取 50 &#181;l 该溶液的等分试样。加入 2 &#181;l 加入体积分数为10%的DMSO水溶液作为内标中性标准品至等分试样中。使用毛细管电泳（见步骤7）分析该等分试样。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>移除用于冲洗壳聚糖薄膜的5 ml PBS。将5 ml肽溶液与偶联剂加入含有壳聚糖薄膜的培养皿中。</li>
	<li>用石蜡膜覆盖培养皿，并将其置于室温下的轨道摇床中。取 50 &#181;l 在设定的时间点取反应介质的等分试样。 
	注意：毛细管电泳（CE）的总分析时间为15分钟，因此可每15分钟取样一次（若同时平行监测两个反应，则可每30分钟取样一次）。 等等。).
	<ol>
		<li>添加 2 &#181;l 加入体积分数为10%的DMSO水溶液作为内标，分别加入各等分试样中。 
		注意：样品应在其采集后立即使用毛细管电泳（CE）进行分析（参见步骤7）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>振荡4小时并取样后，从振荡器上取下培养皿。移除培养皿中的反应液。加入5 ml PBS冲洗壳聚糖薄膜。</li>
	<li>从培养皿中移除 PBS，用超纯水冲洗壳聚糖薄膜，并使其过夜干燥。移除超纯水，将薄膜储存在 -20 &#176;C 在塑料培养皿中。</li>
</ol>
7. 使用毛细管电泳监测接枝反应
<ol>
	<li>从培养皿中取出后，立即按照第5.2节的分析条件注入并分离反应介质的等分试样。</li>
	<li>分离完成后，用超纯水冲洗毛细管10分钟，再通过向空瓶（空气）冲洗10分钟将其干燥。 
	注意：实验可在该阶段暂停。</li>
</ol>
8. 毛细管电泳数据处理
<ol>
	<li>通过检查每次分离过程中的电流以及电渗流标记物（本实验中为 DMSO）的迁移时间是否与寡聚丙烯酸酯标准分离中观察到的数值相似，来验证每次分离的有效性。 
	注：电流值（预期值约为 50 µA）和迁移时间值（预期值为 1.3 min）允许有 10-15% 的波动。若要求更高的重复性，应使用电泳迁移率而非迁移时间。</li>
	<li>对于每一次成功的分离，通过在毛细管电泳软件中选择特定数据集，右键点击“导出”并选择适当的信号，导出原始数据。</li>
	<li>转换毛细管电泳（CE）记录的原始数据（以迁移时间为自变量的紫外吸光度数据）。将 X 轴（迁移时间 tm）按照公式 1 转换为电泳迁移率 µ： 
	<img alt="公式 1" src="/files/ftp_upload/54549/54549eq1.jpg" />&#160;&#160;&#160;&#160; (1) 
	其中 Ld 为至检测器的毛细管长度，Lt 为毛细管总长度，V 为电压，teo 为中性物质的迁移时间（本实验中为内标 DMSO）27。 
	将原始数据的 Y 轴（吸光度，单位 a.u.）按照公式 2 转换为电泳迁移率分布 W(µ)28： 
	<img alt="公式 2" src="/files/ftp_upload/54549/54549eq2.jpg" />&#160;&#160;&#160;&#160; (2)</li>
</ol>
9. 多肽接枝薄膜的进一步表征18
<ol>
	<li>将肽接枝的壳聚糖薄膜卷起后插入4 mm固态核磁共振转子中。向转子中加入磷酸盐缓冲液以使薄膜溶胀，并封闭转子。静置数小时。</li>
	<li>采用13C核磁共振波谱法18分析该薄膜。</li>
</ol>

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</ol>

作者声明不存在任何竞争性经济利益。

本文所述方案的简便性使其非常适合广泛的应用。然而，需要特别注意以下关键步骤。
正确的毛细管电泳仪器准备
在分离未知样品之前（以及在一系列分离结束时），必须立即分离一个已知标准品，以检查当天毛细管和仪器的有效性。该标准品可以是寡聚丙烯酸酯27，或任何已知可在较宽迁移时间范围内产生多个峰的样品。在所有分离过程中监测电流，并分析每次分离中中性标记物的迁移情况，是识别问题的关键步骤。电流不稳定或电流平台值出现较大波动（超过10–15%）可能源于缓冲液（pH或浓度）不一致。如果同时伴随中性标记物迁移时间延迟，则还可能是因为毛细管清洁不充分所致。常规检查缓冲液的pH值，并用新配制的1 M氢氧化钠对毛细管额外冲洗10分钟，可用来预防或纠正此问题。在实验过程中，可采用额外的清洗步骤以确保最佳分离效果，通常包括使用浓氢氧化钠水溶液冲洗，或延长冲洗时间，以再生熔融石英毛细管表面。
正确的数据处理...

游离溶液毛细管电泳（CE）是一种根据溶液中化合物的电荷-摩擦比进行分离的技术1,2。文献中常提到电荷-尺寸比，但这种简化并不适用于聚电解质（包括本研究中的多肽），并且已被证明也不适用于小分子有机化合物3。CE 与其他分离技术的不同之处在于其没有固定相，仅使用背景电解质（通常为缓冲液）。这使得该技术在分析具有复杂基质的多种样品时具有良好的稳健性4，例如植物纤维5、发酵液6、接枝到合成聚合物上的产物7、食品样品8以及难溶性多肽9，且无需繁琐的样品前处理和纯化步骤。这对于存在溶解问题的复杂聚电解质尤其重要（如壳聚糖10和结冷胶11），这些物质在溶液中往往以聚集态或沉淀形式存在，但仍可成功分析而无需样品过滤。此外，对早餐谷物中糖类的分析涉及直接进样水中沉淀的早餐谷物颗粒样品8。该优势也延伸至支化聚电解质或共聚物的分析12,13。在蛋白质组学中的蛋白质分析14、天然或合成多肽的手性分离15以及蛋白质和多肽的微芯片分离16等方面，CE 技术的发展也已取得大量研究成果。由于分离和分析过程在毛细管中进行，仅需使用微量样品和溶剂，从而使 CE 的运行成本低于包括色谱在内的其他分离技术5,6,17。由于 CE 分离速度快，可用于反应动力学的实时监测。这一点已在多肽接枝到壳聚糖薄膜以增强细胞黏附性的研究中得到验证18。
壳聚糖是一种来源于甲壳素的多糖 N-脱乙酰化甲壳素。壳聚糖薄膜可用于多种生物医学应用，例如生物粘合剂19 以及细胞生长基质18,20，由于壳聚糖具有生物相容性21细胞对特定细胞外基质蛋白（如纤连蛋白、胶原蛋白和层粘连蛋白）的黏附与其存活直接相关22值得注意的是，不同类型的细胞通常需要附着于不同的细胞外基质蛋白才能维持存活和正常功能。研究表明，通过在壳聚糖薄膜上接枝纤连蛋白可增强细胞的附着。23然而，此类大分子蛋白质的制备、纯化与接枝在经济上并不可行。相比之下，多种小分子肽已被证明能够模拟大分子细胞外基质蛋白的特性。例如，纤维连接蛋白模拟肽RGD（精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸）和RGDS（精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸）已被用于促进并增强细胞黏附24将RGDS共价接枝到壳聚糖薄膜上，可改善已知与纤连蛋白结合的细胞的黏附性 体内18用具有相同功能的小分子肽替代较大的蛋白质（如纤连蛋白）可显著降低生产成本。
此处，将肽段接枝到壳聚糖上的操作按照先前发表的方法进行18。如先前研究所证实，该方法利用偶联剂EDC-HCl（1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺）和NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）对RGDS的羧基进行活化，从而实现对接枝到壳聚糖薄膜上的功能化修饰，操作简便且效率高。该接枝方法具有两个优势：一是无需对壳聚糖或肽段进行任何化学修饰，二是在水相介质中进行反应，以最大程度地保证与后续细胞培养应用的兼容性18,20。由于偶联剂和肽段可能带有电荷，毛细管电泳（CE）是分析该反应动力学的合适方法。重要的是，通过毛细管电泳对反应动力学进行分析，可实现对接枝反应的实时监测，从而能够优化并定量测定接枝程度。
尽管通常无需进行，但可通过固态核磁共振（NMR，nuclear magnetic resonance）光谱法对肽段在壳聚糖薄膜上的接枝情况进行直接测量，从而在体外验证毛细管电泳（CE）分析的结果25,26，以证明肽段已共价接枝到薄膜上18。然而，与固态核磁共振光谱法相比，CE提供的实时分析能够实时量化肽段的消耗量，从而评估反应动力学。
上述方法简便，可实现对肽段接枝到壳聚糖薄膜过程的实时分析，并能间接定量接枝程度。只要待分析的反应物或产物带有电荷，该方法即可拓展应用于多种化学反应的实时定量评估。

<table><tbody><tr><td>水</td><td>Millipore</td><td></td><td>实验中使用的所有水必须为 Milli-Q 级别</td></tr><tr><td>壳聚糖粉末（中等分子量）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>448877</td><td>使用批号为 MKBH1108V 的产品。天然产物（如多糖）存在显著的批间差异</td></tr><tr><td>乙酸 - Unilab</td><td>Ajax Finechem</td><td>2-2.5L GL</td><td>实验试剂</td></tr><tr><td>二甲基亚砜</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4540</td><td>实验试剂，对皮肤有轻微刺激性，摄入后有害</td></tr><tr><td>氢氧化钠&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221465&amp;nbsp;</td><td>实验试剂，具有腐蚀性&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D80002</td><td>对皮肤有刺激性&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;N&lt;/em&gt;-羟基琥珀酰亚胺&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>130672</td><td>对皮肤有刺激性</td></tr><tr><td>氯化钠&amp;nbsp;</td><td>Ajax Finechem</td><td>466-500G</td><td>实验试剂</td></tr><tr><td>氯化钾 - Univar</td><td>Ajax Finechem</td><td>384-500G</td><td>分析试剂，对皮肤有轻微刺激性</td></tr><tr><td>磷酸氢二钠 - Unilab</td><td>Ajax Finechem</td><td>1234-500G</td><td>实验试剂，对皮肤有轻微刺激性</td></tr><tr><td>磷酸二氢钾 - Univar</td><td>Ajax Finechem</td><td>4745-500G</td><td>分析试剂，对皮肤有轻微刺激性</td></tr><tr><td>寡聚丙烯酸酯标准品</td><td>定制合成</td><td></td><td>合成方法参见参考文献：Castignolles, P.; Gaborieau, M.; Hilder, E. F.; Sprong, E.; Ferguson, C. J.; Gilbert, R. G. &lt;em&gt;Macromol. Rapid Commun.&lt;/em&gt; 2006, &lt;strong&gt;27&lt;/strong&gt;, 42-46</td></tr><tr><td>硼酸&amp;nbsp;</td><td>BDH AnalR, Merck Pty Ltd</td><td>10058</td><td>具有腐蚀性</td></tr><tr><td>盐酸 - Unilab</td><td>Ajax Finechem</td><td>A1367-2.5L</td><td>实验试剂，具有腐蚀性</td></tr><tr><td>熔融石英毛细管</td><td>Polymicro (Molex)</td><td>TSP050375</td><td>带标准聚酰亚胺涂层的柔性熔融石英毛细管，内径 50 &amp;micro;m，外径 363 &amp;micro;m&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Agilent 7100 CE</td><td>Agilent Technologies</td><td>G7100CE</td><td>毛细管电泳仪</td></tr><tr><td>旋转摇床&amp;nbsp;</td><td>IKA</td><td>KS260</td><td></td></tr><tr><td>电子天平</td><td>Mettler Toledo</td><td>MS204S</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Synthesis&amp;nbsp;</td><td>Millipore</td><td>ZMQS5VF01</td><td>超纯水过滤系统</td></tr><tr><td>Parafilm&amp;nbsp;</td><td>Labtek</td><td>PM966</td><td>石蜡膜</td></tr></tbody></table>

利用毛细管电泳实时监测肽在壳聚糖薄膜上的接枝反应

Capillary Electrophoresis to Monitor Peptide Grafting onto Chitosan Films in Real Time

自由溶液毛细管电泳（CE）通过施加电场实现对分析物（通常为溶液中的带电化合物）的分离。与其他分析分离技术（如色谱法）相比，CE 成本低廉、性能稳健，且对于许多复杂的天然基质或聚合物样品，基本无需样品前处理。CE 分离速度快，可用于实时监测混合物的动态变化过程例如，化学反应动力学），因为所观察到的分离化合物信号与其在溶液中的量成正比。
本文展示了毛细管电泳（CE）在监测肽段共价接枝到壳聚糖薄膜上以用于后续生物医学应用方面的高效性。壳聚糖具有抗菌性和生物相容性，是一种适用于细胞生长基质等生物医学应用的优良材料。将RGDS肽（精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸）共价接枝到壳聚糖薄膜表面，旨在增强细胞黏附能力。传统上，通常采用色谱法和氨基酸分析来直接测定接枝肽的含量。然而，毛细管电泳（CE）具有快速分离和无需样品预处理的优势，可实现同样准确但更为实时的肽段接枝过程监测。CE能够分离并定量反应混合物中的不同组分：未接枝的肽段以及化学偶联试剂。通过这种方式，CE的应用可优化薄膜质量，从而提升其在后续应用中的性能。
采用固态核磁共振（NMR）光谱法对壳聚糖薄膜进行表征。该方法耗时较长，且无法实现实时检测，但能够直接测定肽的含量，从而验证毛细管电泳（CE）技术的准确性。

CE 非常适用于监测肽的接枝反应例如，RGDS）接枝到壳聚糖薄膜上。合适的偶联剂包括 EDC-HCl 和 NHS，它们可活化待接枝至壳聚糖的肽段（图1）。毛细管电泳能够将反应体系中不同目标分子分离开来。为确定电泳图谱中各峰的归属，分别将纯RGDS、EDC-HCl和NHS溶解后进样并单独分离。完成峰的指认后，进样反应体系样品，并对其中各种反应物进行鉴定（图2）。EDC-HCl 反应生成副产物 EDH-HCl（3-(((乙氨基)(羟基)亚甲基)氨基)-N,N-二甲基丙-1-胺）。毛细管电泳（CE）分离中以二甲基亚砜（DMSO）作为内标。壳聚糖在接枝实验中以不溶性薄膜形式存在，因此未被注入且在毛细管电泳中不可见。需注意，所有原始数据中的记录迁移时间轴均已转换为电泳淌度轴（公式1），紫外吸光度轴则转换为电泳淌度分布。 W(&#181;）（公式 2）。
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游离溶液毛细管电泳是一种快速、廉价且稳健的分析方法，可实现对化学反应的实时定量监测。本文通过分析壳聚糖薄膜上共价接枝肽以改善细胞黏附的过程，展示了该方法在快速、便捷和精确分析方面的实用性。

自由溶液毛细管电泳（CE）通过施加电场，分离溶液中的分析物，通常为带电化合物。

该毛细管电泳方法的总体目标是实时监测肽在壳聚糖薄膜上的接枝反应。该方法有助于回答分析化学和高分子化学领域中的关键问题，例如反应的进行情况以及接枝过程的效率。该技术的主要优势在于无需样品前处理，可对反应混合物进行实时分析。尽管该方法可用于研究反应过程，但也适用于其他体系，例如抗癌药物与药物载体的结合，或大米及早餐谷物的消化过程。称取两克冰醋酸，用超纯水定容至100毫升。将1.7克壳聚糖粉末加入100毫升质量分数为2%的醋酸水溶液中。在室温下，使用搅拌子和磁力搅拌器搅拌五天，期间可用铝箔覆盖或置于避光环境中。将壳聚糖分散液在23°C条件下以1,076 × g离心一小时。离心后，用注射器收集上清液，并弃去沉淀物。每种薄膜制备时，将10毫升壳聚糖悬浮液分装至直径9厘米的塑料培养皿中，在室温下静置。将薄膜盖好后干燥至少7天。使用剪刀将干燥的薄膜切成1厘米×1厘米的正方形小片。实验可在此阶段暂停。将10片方形壳聚糖膜置于培养皿中，用5毫升磷酸盐缓冲液在室温下冲洗2小时。在此期间，准备并校准毛细管电泳仪。使用钝器在长度为43.5厘米的裸熔融石英毛细管外层聚合物涂层上指定位置划痕，然后将其折断，以制备内径为50微米的毛细管。在距进样端8.5厘米处用打火机烧去聚合物涂层，形成检测窗口。待毛细管冷却后，用乙醇擦拭清洁。然后，用打火机将毛细管两端的涂层各灼烧数毫米。冷却后，再次用乙醇擦拭干净。将毛细管置于检测窗口内，并将其安装到毛细管卡盒中，使毛细管在进样端和出样端的长度相等，并缠绕在卡盒的转轴上。然后，将卡盒安装到毛细管电泳仪中。为每次分离设置方法参数。在软件菜单中，选择“方法”，然后编辑整个方法。选择 CE 选项卡以编辑 CE 条件。设置分离所用的温度、时间、电压和样品瓶。在预处理部分，设置连续冲洗程序。第一种方法依次使用：1 M 氢氧化钠冲洗 10 分钟，0.1 M 氢氧化钠冲洗 5 分钟，超纯水冲洗 5 分钟，以及 pH 9.2 的 75 mM 硼酸钠缓冲液冲洗 5 分钟。序列中的其他方法按照相同步骤进行检查。对于后续方法，在“预处理”部分设置连续冲洗步骤为：1 M 氢氧化钠冲洗 1 分钟，以及 pH 9.2 的 75 mM 硼酸钠缓冲液冲洗 5 分钟。在进样部分，为所有方法设置水动力进样参数：30 毫巴压力，持续 10 秒。在分离部分，为所有方法设置分离条件：30 千伏电压，25 摄氏度下运行 9 分钟。进样并分离中性内标物。对于中性内标，将10微升体积分数为10%的二甲基亚砜水溶液稀释至450微升75毫摩尔/升的硼酸钠缓冲液中。在开始序列前，确保序列参数已设置为正确的文件夹和文件编号。然后按下“序列”以启动实验。分离标准品可在实验运行前对仪器进行验证，这对于实验的成功至关重要。然后以相同方式注入并分离寡聚丙烯酸酯标准品，以检查毛细管的有效性。在此暂停操作，直至接枝反应

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