Measuring G-protein-coupled Receptor Signaling via Radio-labeled GTP Binding

Chirag Vasavda; Nicholas W. Zaccor; Paul C. Scherer; Charlotte J. Sumner; Solomon H. Snyder

doi:10.3791/55561

JoVE Journal
Biochemistry

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Measuring G-protein-coupled Receptor Signaling via Radio-labeled GTP Binding

通过放射性标记的GTP结合测量G蛋白偶联的受体信号

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10:13 min

June 9, 2017

DOI: 10.3791/55561-v

Chirag Vasavda*¹, Nicholas W. Zaccor*¹, Paul C. Scherer¹, Charlotte J. Sumner^1,2, Solomon H. Snyder^1,3,4

¹The Solomon H. Snyder Department of Neuroscience,Johns Hopkins University School of Medicine, ²Department of Neurology and neurosurgery,Johns Hopkins University School of Medicine, ³Departments of Pharmacology and Molecular Sciences,Johns Hopkins University School of Medicine, ⁴Department of Psychiatry and Behavioral Sciences,Johns Hopkins University School of Medicine

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三磷酸鸟苷（GTP）结合是G蛋白偶联受体（GPCR）激活中最早的事件之一。该方案描述了如何通过监测放射性标记的GTP类似物[ ³⁵ S]鸟苷-5'-O-（3-硫代）三磷酸（[ ³⁵ S]GTPγS）的结合在药理学上表征特异性GPCR-配体相互作用对感兴趣配体的反应。

该程序的总体目标是分离含有 G 蛋白偶联受体或 GPCR 的细胞膜，并使用功能性 GTP 结合论文研究 GPCR 药理学。该方法可以帮助回答生物化学领域中有关已建立或孤立的 G 蛋白偶联受体的药理学特性的关键问题。主要优点是它简单、快速，并且测量 G 蛋白偶联受体信号传导中最近端的事件。

首先，将人胚胎肾细胞接种在 10 mL 完整 DMEM 中的 10 cm 组织培养板上。在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育细胞，直到达到 70% 至 80% 汇合。孵育后，根据制造商的指南，使用合适的转染试剂用 HAMOR1 转染细胞。

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