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DOI: 10.3791/58191-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
大脑中动脉腔内丝闭塞是啮齿类动物实验性脑卒中体内最常用的模型。另一种手术方法, 允许颈动脉修复在这里进行, 这使得颈总动脉再灌注和充分再灌注到大脑中动脉区域。
此方法可以帮助回答实验笔画字段中的关键问题,例如如何减少与这些模型的关联,以及如何提高可重复性。这项技术的主要优点是,它允许通过常见的胡萝卜动脉再灌注,因此不依赖于威利斯的圆,它可以在动物之间解剖变化,因此可能有助于实验结果测量中看到的变异性。此方法的可视化演示至关重要,因为由于使用密封剂以确保 CCA 在维修后获得完全专利所涉及的技术困难,因此很难了解 CCA 容器维修步骤。
首先,根据测试协议准备和麻醉鼠标。然后使用数字15手术刀刀片,使一个1.5厘米的中线切口在暴露的腹颈。使用钝解剖技术,轻轻地将唾液腺缩回一侧,露出气管。
然后解剖常见的胡萝卜动脉,或CCA,从周围的组织和血管神经释放。在此之后,通过两个小段的不可溶解的6-0缝合下CCA,后向CCA,和腹到阴道神经。拉一条丝绸领带靠近外科医生,并松散地系在CCA周围。
然后松散地将第二根丝绸系在内部和外部的卡皮德动脉的分叉上。接下来,在外向系上方应用微血管夹,确保分叉不受阻。使用微型静脉剪刀在 CCA 上制作一个小孔。
将 7-0 硅胶涂层的微丝插入 CCA 中,并将其推进到微血管夹中。然后拧紧心系,将灯丝固定到位。并使用夹子去除微血管夹。
接下来,将灯丝推进到内部胡萝卜动脉(ICA)。一旦灯丝头通过外向系,拉紧领带,防止失血。使用端丝领带,将 CCA 提起并拉到小鼠身体的外侧,将灯丝引导到弯曲处,经过 pterygopalatin 动脉(PPA)的开口。
一旦灯丝就位,通过进一步拧紧远方的丝绸领带来固定它。在 MCAO 期结束时,收回灯丝,直到白色长丝头清晰可见。然后松开远近 CCA 系,将灯丝头从容器中拆下。
接下来,从容器中完全拆下灯丝头。在此之后,将微血管夹放在水平位置,朝向 CCA 分叉,并在外向扎带旁边放置。然后将另一个剪辑放在近近 CCA 领带下方,朝向外科医生。
小心使用杜蒙 5 钳子去除两个丝绸领带。并使用无菌棉芽干燥区域。然后将纤维素原和血栓密封剂溶液一和二添加到无菌培养皿中。
使用微静脉剪刀和钝解剖技术,获得细腹片的胸腺肌。然后,使用Dumont 5钳子,拿组织垫,并均匀地混合在纤维素原和血栓密封剂溶液中。在这里,重要的是要确保组织垫足够大,足以覆盖CCA切口。
一旦它混合在两个溶液中,必须立即放在切口上,以防止过度凝固和粘附不良。两个溶液混合后,将组织垫取出到 CCA 切口。将组织垫平放在具有中等压力的切口上,并打开钳子。
迅速取出心骨微血管夹,同时将组织垫放在位上。接下来,慢慢缓解来自组织垫的压力,让血液在切口区域动。现在,慢慢地轻轻地释放近近微血管夹的压力,然后完全去除。
去除顶部夹允许少量血液激活密封剂。远点夹的稳步释放允许在切口部位逐渐增加压力,进一步激活,并有助于防止修复失败。最后,一旦容器被密封,用可溶解的6-0缝合缝合伤口。
在该协议中,对24只成年雄性小鼠进行了中脑动脉闭塞(MCAO)。避免ECA结扎和增加镇痛表明在MCAO后48小时减肥的趋势。丝切除5分钟后,MCA脑区域区域脑血流量显著增加。
灌注一直保持到船舶修理,在CCA船只修理后,向MCA领土灌注增加。这表明,与仅依靠威利斯的圈子相比,CCA的修复允许血液灌注增加对缺血区。T2 加权 MRI 用于确定总 LV 和 DTI 扫描用于确定 MCAO 后 48 小时的核心 LV。
这两个群体之间没有显著的区别。有趣的是,CCA 修复组中,总 LV 和核心 LV 的可变性显著降低。我们的分析表明,与典型的 CCA 连接程序相比,在 MCAO 之后,每个治疗组需要更少的动物才能证明 LV 减少了 30%。
在尝试此过程时,重要的是要记住确保组织包的尺寸足以覆盖 CCA 切口。此外,在将垫放在 CCA 上之前,速度很重要,以防止密封剂过度凝固。
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