Isolation of F<sub>1</sub>-ATPase from the Parasitic Protist <em>Trypanosoma brucei</em>

Ond&#345;ej Gahura; Alena Z&#237;kov&#225;

doi:10.3791/58334

JoVE Journal
Biochemistry

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JoVE Journal Biochemistry

Isolation of F₁-ATPase from the Parasitic Protist Trypanosoma brucei

寄生性锥虫锥虫锥虫的 f1-atpase 的分离

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08:44 min

January 22, 2019

DOI: 10.3791/58334-v

Ondřej Gahura¹, Alena Zíková^1,2

¹Biology Centre,Czech Academy of Science, Institute of Parasitology, ²Faculty of Science,University of South Bohemia

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

该方案描述了从锥虫培养阶段的 f1-atpase 的纯化.该程序产生了高度纯、均匀和活性的复合物, 适用于结构和酶学研究。

F1-ATPase 的纯化基于一种经典的生化方法，这证明对于我们了解其他 ATP 合成器的 ATP 生产机制至关重要。该技术的主要优点是，它产生一种高度纯净的酶，适合通过X射线晶体学或低温电子显微镜进行结构测定。虽然此协议针对 F1-ATPase 与锥形体进行分离进行了优化，但它可以适应其他来源，如组织或培养细胞，以及各种致病性蛋白酶。

这项技术可能导致新药的识别，以治疗严重的人类疾病。例如，结核分枝杆菌F-ATPase是结核病治疗的经过认证的药物靶点。为了开始协议，解冻并轻轻地重新暂停线粒体，也被称为米托皮斯特，以前通过低吨位解解从1倍10到11到2倍10到11个细胞的青霉蛋白锥虫布鲁西在5毫升的冰冷的缓冲剂 A.保持样品冷却。

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