毛尿胰腺腺腺腺癌超声引导正射植入

该协议允许在原生组织部位研究胰腺癌，同时最大限度地减少肿瘤细胞注射期间的炎症，并为产生大量小鼠提供高通量方法。通过使用超声波指导，消除了腹部手术的需要。在我们手中，与传统的正畸植入相比，UG-OTIM的内面壁播种率要低得多。

UG-OTIM 产生的肿瘤可概括胰腺肿瘤微环境的组织学和免疫生物学特征，因此可用于在临床相关环境中研究新的治疗组合。我们开发了这种治疗免疫肿瘤学和癌症生物学疗法的协议，但它可用于其他研究领域，包括研究正常的胰腺功能或疾病状态，如糖尿病。针插入和注射的实时超声成像是该方法不可分割的一部分。

因此，该步骤的可视化演示对于正确的技术至关重要。在开始手术之前，我们在冰上适当体积的无菌、冷PBS中暂停感兴趣的胰腺电容腺癌细胞系。将笼子放在 37 摄氏度的加热板上，用适当的消毒剂彻底清洁生物安全柜、感应室和超声波阶段。

将超声波阶段的加热功能设置为37摄氏度，麻醉后，将软膏涂抹在第一动物的眼睛上。将鼠标放在超声波舞台上的背背，用胶带轻轻地将上肢和下肢固定到舞台上。使用无菌棉尖施用器将一层厚大方的脱毛霜涂在腹部左上象限上脾脏区域到中线。

一分钟后，使用干纱布垫轻轻去除头发，然后用盐水湿纱布去除多余的脱毛霜。然后把鼠标放在一个新的，干净的笼子在加热器上。对于超声波引导肿瘤细胞植入，调整超声波平台，使表面平行于地面，并站在动物的左侧，鼠标头朝右。

调整传感器位置，以便获得横向腹部图像，用胶带将鼠标四肢固定到平台上。轻轻降低传感器以接触小鼠腹部并调整传感器，直到胰腺清晰可见。找到左肾和脾脏，在腹腔中提供准确的取向。

当注射部位被找到时，将29量具1/2英寸胰岛素注射器与25微升的肿瘤细胞悬浮液混合，然后用无菌酒精准备垫擦拭针尖。使用钝边钳抓住小鼠皮肤和内皮壁，以增加注射部位的张力。将注射器以大约 25 到 45 度角保持到超声波平台表面，缓慢地将针头通过皮肤和眼皮壁。

在利用超声波可视化引导针头直接进入胰腺之前，确认针头已刺穿了眼皮。当针头就位时，慢慢注射肿瘤细胞。在通过超声波正确注射的胰腺中，可以明显地形成胰腺内的液体玻利瓦尔。

一旦注射了全部悬浮液，并且可以通过超声波观察液体玻利瓦尔，保持注射器非常静止几秒钟，然后慢慢从小鼠腹部收回针头，注意不要干扰注射的细胞。然后将鼠标放入加热器上新的清洁笼中，进行监控，直到完全恢复。在胰腺中正确放置针头，包括针头深度和角度，是本协议中的关键步骤。

液体玻利瓦尔的可视化有助于确认肿瘤注射成功。控制注射深度是最困难的方面。我的建议是练习三脚架注射， 通过超声波和尸检确认液体博卢斯。

通过每周超声波成像监测肿瘤植入和生长速度，可在整个实验期间显示胰腺边界内的肿瘤。高滴度肿瘤注射导致肿瘤轴承动物在注射后三周比低滴度队列更高的比例。尽管肿瘤发病延迟，但两种剂量之间的肿瘤总体生长速度没有显著差异。

同样，虽然两个队列之间的存活率没有显著差异，但他们倾向于在低滴度队列中略有提高存活率。高滴度组组在注射后四周内，产生更多在临床前研究中无法滚动的肿瘤小鼠。牺牲后，超声引导正畸肿瘤植入模型肿瘤的解剖与自发的KPC肿瘤相似，组织学分析表明，两种模型均有相似的异常导管结构模式，并概括了人类疾病的形态。

在这两种模型中，肿瘤被T细胞渗透不良，但高度渗透于巨噬细胞。请记住，在继续注射之前，请以适当的角度握住注射器，以便顺利进入胰腺，并确认针头在胰腺中。肿瘤生长可以监测，肿瘤可以收获，通过磷细胞学或免疫组织化学进行分析，以确定干预的影响。