期新生儿大鼠干细胞的内切内培养

描述是通过期期新生儿大鼠的四边形注射进行间质质质细胞（MSCs）的腹内移植的协议。这项技术是将干细胞和药物移植到新生儿大鼠肺以评估其疗效的临床可行选择。

内切注射是一种临床生物技术，用于将干细胞和药物移植到新生儿肺部，以评估Chilman的疗效。这种技术在新生儿大鼠的各种初级应用中可能非常适用，是一种相对容易且具有成本效益的肺病治疗措施。产后第五天，在60度角的插管站上，对斯普拉格-道利大鼠幼崽进行麻醉。

并在每只小狗的所有四肢上贴上实验室标签胶带，以确保它们就位。在每个鼻子下面涂抹胶带来固定头部。并精确定位穿刺气管切除术的第一个颈部。

使用 75% 酒精准备垫对切口区域进行消毒。并在气管上方进行垂直的3厘米中线切口，以避免损坏管状动脉。使用弯曲的锥形钳子，没有挂钩，以分离出脂肪和肌肉层，以定位气管。

当可以观察到气管时，使用钳子抓住气管，并使用装有30量针的100微升注射器，在吸入阶段将第五发蝇荧光素酶GP的十倍注射，在30微升盐水中标记的间质热细胞进入气管。当所有细胞都注射后，用160根丝线将结尽可能紧密地绑住切口。尽可能短切线。

然后让幼崽从麻醉中恢复过来，在温暖的地方进行监测，直到它温暖、粉红色，并且能够自发运动，然后再将动物返回到笼子里。为了跟踪移植的人类中质体细胞在大鼠从手术中恢复15分钟后，在PBS中注射每公斤125毫克路西法钾盐的再麻醉幼崽。注射后 10 分钟，使用小型动物成像系统以 5-15 秒的间隔获取顺序图像，并采用中等装箱、1 f-stop 和 26 厘米的视野。

然后使用成像软件根据感兴趣的自动区域量化肺部的发光活动。在标有人类中层干细胞的荧光素酶萤火虫中观察到高水平的GP表达。中质干细胞可以进一步的特点是其细胞表面标记表达和它们区分成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞的能力。

VIVO中移植的人类中质细胞的发光成像显示，用正常盐水治疗的大鼠的肺区域缺乏发光信号。在用中质干细胞治疗的大鼠中，在这些动物的气管和中肺区域观察到发光。事实上，在这个具有代表性的分析中，对发光强度的量化表明，与用正常盐水治疗的老鼠相比，用间质干细胞治疗的大鼠的发光活性增加了约13倍。

尝试此程序时，在不限制周围动脉的情况下解剖和隔离气管非常重要。该技术允许研究细胞内注射和新生儿帕尔默病药物的影响，使用射线与人类患者的模式。