研究利普托梅宁格疾病直接靶向治疗的穆林·奥马亚异种格拉夫特模型

Murine Ommaya，模仿临床上使用的Ommaya水库，允许研究人员在临床前模型中测试各种直接针对性脑转移和普遍致命的瘦素疾病的治疗方法。这项技术的优点是，研究人员可以将微升的药物直接输送到脑脊液中，以治疗中枢神经系统转移，绕过血脑屏障。这个Murine Ommaya植入协议是为有立体手术经验和无菌技术培训的研究人员或技术人员设计的，这对确保这一程序的成功至关重要。

展示这一程序的将是来自南佛罗里达大学比较医学的玛吉·鲍德温和米歇尔·丹尼尔森，以及莫菲特癌症中心和研究所的彼得·福西斯博士实验室的高级研究员文森特·劳。首先，以每公斤一毫克的皮下注射小鼠持续释放丁丙诺啡。麻醉小鼠后，准备手术。

将手术现场与足够的边界区域夹住，以防止毛皮污染切口。剃掉整个头部表面的毛皮，并使用无菌技术准备皮肤。然后用抗腐剂使部位饱和，从部位中心到周围工作，并允许其干燥。

定位身体，以确保脊柱与西斯特纳巨无霸保持水平。在尾部施加轻微牵引力时，将胶带放在尾部底座上以固定尾部。应用无菌窗帘或无菌胶粘剂支持的塑料窗帘材料，以保护手术现场免受污染。

随着颈部的充分延伸，运行手术剪刀尖向下与轻微的压力穿过腹腔骨，开始只是之间的针刺。做一个小的三到五毫米中线切口，略高于苍白的凹陷。将细胞悬浮的五微升绘制成 30 量表汉密尔顿注射器。

使用一到两毫米尖端的钝尖钳子轻轻按压西斯特纳巨无霸。在封闭式位置引入提示，并在对 dura 施加向下压力时打开它们。重复钝解剖，直到杜拉尔膜容易识别，相关血管在暴露区域可见。

当将钳子打开以缩回周围的肌肉时，在杜拉下引入一个 30 度量标的非结扎针，以可视化斜面，确保针头只在斜面本身之外引入。慢慢地部署注射器柱塞，并在杜拉正下方输送细胞。如果注意到注射部位的泄漏，请使用棉尖施用器施加温和的压力。

通过涂抹伤口夹或微滴皮肤粘合剂来关闭皮肤。手术后第一周每天监测小鼠。如果小鼠出现疼痛或痛苦，根据兽医咨询和指示，每12至24小时注射10毫克每公斤卡洛芬，最多5天。

使用 25 仪表微型注射端口和 1 毫米隔板组装 Murine Ommaya 注射装置。使用氰丙烯酸酯无菌粘合剂，确保约2.5毫米的金属管渗透到右脑半球，并根据无菌技术准备皮肤。做一个小的皮肤切口，然后钝解剖底皮下组织，以暴露头骨。

使用过氧化氢浸泡棉尖施用棒干燥头骨。在头骨后部0.5毫米和胸后部1.1毫米的头骨上钻一个0.9毫米的毛刺孔，以暴露杜拉物质。将微钻移到一边，并轻轻地在毛刺孔周围对骨头进行评分。

使用氰丙烯酸酯无菌粘合剂在头骨上贴一个注射端口，并将其插入约2.5毫米的深度。用 4-0 不可吸收的尼龙缝合切口，缝合图案中断或包绳缝合。将手术后的小鼠关在单独的笼子里进行恢复。

要给小鼠剂量，使用端口注射适配器和汉密尔顿注射器访问穆林奥马亚。使用钳子，握住微型喷射端口的顶部，轻轻地将端口喷射器适配器完全插入端口隔膜。注射后，用钳子将穆林·奥马亚从端口注射适配器中分离。

为了可视化注射的路线，通过穆林奥马亚模型注射了2%埃文斯蓝。染料在15分钟内成功渗透到心室和大脑。30分钟后，这种染料在脊髓上变得可见。

作为概念的证明，BALB/c小鼠被注射了带有荧光酶标签的Her2+TUBO乳腺癌细胞系，并植入了穆林奥马亚。注射后大约一周，小鼠开始发展LMD。这些小鼠每周接受一次长达四周的Her2抗体免疫治疗，无论是通过腹内注射进行全身治疗，还是通过Murine Ommaya进行内科治疗。

虽然未经治疗的老鼠在第19天死亡，但所有通过穆林·奥马亚获得内部治疗的老鼠都幸存了下来。到第四周，观察到肿瘤的完全回归。与接受全身治疗的小鼠相比，接受体内治疗的小鼠的整体存活时间要长得多。

在尝试此程序时，在放置穆林奥马亚之前，头骨必须干燥。使用少量胶水，将穆林·奥马亚放置约10秒，粘附在头骨上。通过这项技术，研究人员可以在小鼠模型中探索多种癌症药物，这些药物在临床上与为中枢神经系统转移患者设计合理的治疗策略有关。