基于渗透泵的药物递送用于中枢神经系统 体内 髓鞘再生研究

脱髓鞘发生在多种中枢神经系统疾病中。可靠的 体内 药物递送技术对于髓鞘重洗药物检测是必要的。该协议描述了一种基于渗透泵的方法，该方法允许将药物长期直接输送到脑实质中并提高药物的生物利用度，在髓鞘再生研究中具有广泛的应用。

渗透泵对髓鞘再生的研究具有重要价值，特别是对半衰期短、血脑屏障通透性差、外周副作用大的药物。渗透泵可以绕过血脑屏障，将药物直接输送到胼胝体，有效提高药物的生物利用度，特别是对于一些半衰期短的药物。首先，用牙条和耳杆将麻醉鼠标的头部固定在立体定位装置中。

覆盖动物身体，手术部位除外。使用手术刀，从颈部底部到眼睛之间对皮肤进行一厘米长的中高潮切口，以暴露颅骨。使用含有30%过氧化氢的棉签，轻轻擦拭颅骨表面以可视化颅骨结构。

调整齿条和耳杆的高度，将 lambda 点和前牙点放置在相同的高度。将 10 微升和 33 号注射器针头的尖端轻轻放在前凸点，并将 X、Y 和 Z 坐标重置为零。将注射器移动到注射部位。

在注射部位的颅骨上慢慢钻一个小毛刺孔，而不用一微升26号和0.45毫米注射器针头穿透硬脑膜。通过孔将微升注射器针头缓慢插入脑组织，直到达到一定深度。以每分钟0.5微升的速度注射1.5微升的1%赖索铁蛋白。

等待五分钟，然后拔出注射器，并用5-0个手术缝合线缝合皮肤。将单独接受手术的小鼠放在笼子里，并在手术后每天监测小鼠。用组织粘合剂将三个深度调节垫片连接到脑输液套管的针上，以达到接近胼胝体的1.5毫米注射深度。

通过将带有泵包的注射器针头连接到一毫升注射器上来填充渗透泵，然后吸出药物。将泵保持直立位置。将注射器插入泵顶部的开口中，并缓慢注射药物而不会产生气泡。

当液体从开口流出时，慢慢拉出注射器。使用剪刀或钳子，从流量调节器上取下白色法兰。将流量调节器插入泵中。

要确定渗透泵中是否存在气泡，请在填充前后分别称量渗透泵。根据动物的大小将导管修剪到所需的长度。将导管连接到脑输液套管上。

使用注射器用药物填充导管，而不引入空气。将导管连接到流量慢化器，使其覆盖暴露的流量慢化器约四毫米。将填充的泵浸入无菌的0.9%生理盐水或PBS中，在37摄氏度下至少四到六个小时。

更喜欢在实施后延长一夜。再次将鼠标固定在立体定位器上。打开先前缝合的手术切口，将切口扩大到肩胛骨。

将肩胛骨处的皮肤与皮下结缔组织分开，使用止血钳或镊子打开腔，并将渗透泵放入腔中。用棉签轻轻擦拭并露出建立脱髓鞘模型时产生的颅骨表面上的针孔。将脑输液套管垂直穿过针孔，并用组织粘合剂将其固定在颅骨上。

用一把剪刀取下脑输液套管上方的可拆卸标签。缝合切口或用组织粘合剂将其固定。手术后将动物单独放在笼子里。

在实施DAPI染色后发现，脑组织中的针孔位于白质的正上方，表明渗透泵的脑输液套管的成功实施。使用成熟的少突胶质细胞标记物MAG探针进行原位杂交实验，以标记新分化的少突胶质细胞。结果表明，UM206处理在脱髓鞘区域产生的MAG阳性细胞多于对照组。

脱髓鞘区域透射电子显微镜检查显示，与对照组相比，UM206治疗组的髓鞘轴突数量增加，提示UM206诱导更高水平的髓鞘化。在准备渗透泵时，请注意不要将任何气泡引入系统。